低氘水抗H2O2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化損傷的作用及機(jī)制研究.pdf

1、[目的]：
　　比較不同氘體積濃度的低氘水對(duì)過(guò)氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)PC12細(xì)胞株氧化損傷的作用及機(jī)制，為新的抗氧化藥物的開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)
　　[方法]：
　　首先，MTT法檢測(cè)不同濃度的H2O2對(duì)PC12細(xì)胞損傷的影響以確定造模濃度，接著采用MTT法檢測(cè)不同濃度的低氘水對(duì)PC12細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響以明確低氘水對(duì)正常PC12細(xì)胞有無(wú)毒性作用，最后采用MTT法檢測(cè)不同濃度的低氘水對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的影響;采用

2、DCF-DA熒光探針結(jié)合熒光顯微鏡檢測(cè)不同濃度的低氘水作用后，細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平;免疫熒光技術(shù)檢測(cè)不同濃度的低氘水作用后細(xì)胞內(nèi)相關(guān)抗氧化酶類超氧化物歧化酶(SOD)和過(guò)氧化氫酶(CAT)的含量變化;western-blot檢測(cè)不同濃度低氘水作用后對(duì)細(xì)胞內(nèi)PI3K-Akt/PKB信號(hào)通路中相關(guān)蛋白PTEN、p-PDK1、Akt、p-Akt、bcl-2和p-GSK-3β蛋白的表達(dá)變化水平。
　　[結(jié)果]：
　　1.不同濃

3、度的過(guò)氧化氫對(duì)PC12細(xì)胞損傷的影響:MTT結(jié)果顯示隨著H2O2濃度的升高，PC12細(xì)胞的增殖能力逐漸下降，在H2O2濃度為100μM的時(shí)候，細(xì)胞生長(zhǎng)率為52％。
　　2.低氘水對(duì)PC12細(xì)胞增殖的影響:MTT結(jié)果顯示隨著培養(yǎng)基中氘含量下降，PC12細(xì)胞的增殖能力不受影響(P＞0.05）。
　　3.低氘水對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的影響:MTT結(jié)果顯示在100μM誘導(dǎo)的氧化損傷下，隨著培養(yǎng)基中氘含量下降，PC12細(xì)胞的生

4、長(zhǎng)率逐漸上升。
　　4.低氘水能夠降低H2O2誘導(dǎo)下細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平:ROS結(jié)果顯示隨著培養(yǎng)基中氘含量下降，ROS水平逐漸降低。
　　5.低氘水能提高細(xì)胞內(nèi)相關(guān)抗氧化酶類超氧化物歧化酶(SOD)和過(guò)氧化氫酶(CAT)活力:CAT及SOD檢測(cè)結(jié)果顯隨著培養(yǎng)基中氘含量下降，PC12細(xì)胞內(nèi)CAT及SOD酶活力上升。
　　6.低氘水影響PI3K-Akt/PKB信號(hào)通路中相關(guān)蛋白PTEN、p-PDK1、Akt、p-Ak