EphA2在大腸腺癌中的表達(dá)及其表達(dá)的體外抑制研究.pdf

1、大腸癌是我國較常見的消化道惡性腫瘤，近年來其發(fā)病率呈逐漸升高的趨勢。在西方國家大腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，近50％的患者在明確診斷5年內(nèi)死亡，其死亡率居惡性腫瘤的第2位。大腸癌的發(fā)生、發(fā)展是多步驟、多基因參與的分子事件，包括多個癌基因的激活和抑癌基因的失活、基因組穩(wěn)定性調(diào)控系統(tǒng)的改變和DNA甲基化等眾多改變。并且這些基因改變也不遵循嚴(yán)格的先后順序，它們之間的聯(lián)系也不具有特異性，這種現(xiàn)象說明大腸癌的發(fā)生并不遵循單一的途徑。 受體

2、酪氨酸激酶家族多為轉(zhuǎn)化癌基因產(chǎn)物，研究者廣泛認(rèn)為：該家族與常見人類腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。肝細(xì)胞生紅細(xì)胞生成素(EPH)Eph受體家族是受體酪氨酸激酶家族(RTKs)中已知最大家族，該受體家族是通過被稱之為ephrin(EFNs)的細(xì)胞表面配體的相互作用而被激活。 EphA2是Eph亞家族成員之一，與Eph家族其他成員相比，EphA2廣泛高表達(dá)于不同的腫瘤組織和細(xì)胞系，如：乳腺癌、惡性黑色素瘤、前列腺癌和食管癌，腎細(xì)胞癌等，目前認(rèn)

3、為EphA2參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，是功能強(qiáng)大的癌基因。已經(jīng)證實(shí)EphA2的高表達(dá)能誘導(dǎo)非轉(zhuǎn)化乳腺和前列腺上皮細(xì)胞在體內(nèi)外的惡性轉(zhuǎn)化并促進(jìn)其侵襲轉(zhuǎn)移。應(yīng)用EphA2蛋白的抗體靶向抑制試驗(yàn)，下調(diào)EphA2蛋白表達(dá)的同時，也抑制了腫瘤細(xì)胞的生長，進(jìn)而降低腫瘤的惡性程度，但其是否參與腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)目前未見報道，因此該研究希望通過對大腸腺癌組織中細(xì)胞周期、細(xì)胞增值率、DNA倍體與EphA2關(guān)系的研究，明確EphA2與大腸腺癌癌細(xì)胞的細(xì)胞周

4、期和細(xì)胞增值率的關(guān)系。另有研究發(fā)現(xiàn)EphA2與其ephrin配體相結(jié)合，能抑制整合素調(diào)節(jié)細(xì)胞的粘附作用，從而降低細(xì)胞粘連，導(dǎo)致細(xì)胞具有高度的組織侵襲性。 本課題利用免疫組織化學(xué)方法(SP法)及逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RT-PCR)和流式細(xì)胞技術(shù)(FlowCytometer,FCM)，檢測EphA2在正常大腸粘膜組織和大腸腺癌組織中的表達(dá)及正常大腸粘膜組織和大腸腺癌組織中DNA倍體、細(xì)胞周期、細(xì)胞增值率，從蛋白水平及mRNA、D

5、NA水平觀察了EphA2的表達(dá)與臨床病理因素和DNA倍體、細(xì)胞周期、細(xì)胞增值率之間的關(guān)系，探討EphA2癌基因在大腸腺癌發(fā)生、發(fā)展和浸潤、轉(zhuǎn)移及預(yù)后中的作用及其與KAll腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因二者在大腸腺癌發(fā)生發(fā)展中的相互關(guān)系。同時應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導(dǎo)的RNAi技術(shù)抑制EphA2在結(jié)腸腺癌細(xì)胞系HCa8中的表達(dá)，以期了解EphA2在大腸腺癌中的作用機(jī)制及預(yù)后價值，并為大腸腺癌的基因治療提供理論依據(jù)。 本研究分為以下兩部分：