TGFβ-1、IL-1β對退變髓核細胞中ADAMTS-4、ADAMTS-5、TIMP-3表達的影響.pdf

1、[目的]椎間盤組織代謝的穩(wěn)定伴隨著一系列復雜的和精確的協(xié)調(diào)，包括細胞因子、生長因子、酶和酶的抑制劑。近年來椎間盤退變的生物治療策略是通過前炎癥細胞因子上調(diào)關(guān)鍵基質(zhì)蛋白產(chǎn)生和減少分解代謝。TGF-β具有促進人纖維環(huán)細胞分裂，及促進椎間盤細胞合成蛋白多糖的作用，IL-1β參與分解代謝。它們兩者促人髓核細胞增殖的關(guān)系，是否通過對ADAMTS-4、-5、TIMP-3的調(diào)節(jié)來參與細胞外基質(zhì)代謝，以及它們在髓核細胞和組織中對ADAMTS-4、-5、

2、TIMP-3表達的影響，是本課題研究的內(nèi)容。
　　[方法]1選取Christian MRI退變3級且年齡小于40歲的患者髓核組織進行體外培養(yǎng)，觀察人原代、傳代髓核細胞形態(tài)和生長狀態(tài)，并進行細胞甲苯胺蘭染色和Ⅱ型膠原(CollagenⅡ)免疫組化標記鑒定，通過CCK8檢測第三代髓核細胞生長活力，為下一步的實驗研究奠定細胞學基礎。2通過CCK8檢測1ng/ml、10ng/ml TGFβ-1或IL-1β刺激48h對髓核細胞增殖的影響。3

3、通過RT-PCR定量分析，探討不同濃度TGFβ-1或IL-1β刺激不同時間，ADAMTS-4、ADAMTS-5及TIMP3 mRNA表達的變化情況。4免疫組化檢測ADAMTS-4、ADAMTS-5、TIMP-3及TGFβ-1、IL-1β在頸椎和腰椎退變髓核細胞和組織表達中的特點。5用Western blot方法進行了頸椎和腰椎表達TGFβ-1、IL-1β、ADAMTS-4、ADAMTS-5和TIMP-3蛋白的定性。
　　[結(jié)果]1

4、10ng/mlTGFβ-1刺激48h對退變髓核細胞增殖有促進作用，10ng/mlIL-1β刺激48h對退變髓核細胞增殖有抑制作用。2在基因水平上，RT-PCR結(jié)果顯示:①隨著TGFβ-1濃度的升高，上調(diào)TIMP-3 mRNA的表達。②高濃度的TGFβ-1(10ng/ml)促進髓核細胞表達ADAMTS-4 mRNA。③IL-1β(1ng/ml、10ng/ml)刺激48小時，上調(diào)ADAMTS-4 mRNA表達。④不同濃度IL-1β(0.1n

5、g/ml、1ng/ml、10ng/ml)刺激16h，ADAMTS-5 mRNA的表達明顯受到抑制。⑤不同濃度IL-1β(0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml)刺激24或48小時，對TIMP-3 mRNA相對表達量無調(diào)節(jié)作用。3在蛋白水平上，免疫組化檢測結(jié)果顯示:ADAMTS-4、 ADAMTS-5合成后主要分泌至基質(zhì)中;TIMP-3主要存在于細胞核和胞漿中;TGFβ-1表達在細胞膜上，是跨膜蛋白;IL-1β存在于細胞核和胞漿中