豬腎小管發(fā)育及壞死后修復(fù)過程的研究.pdf

1、1、目的:
　?、琶鞔_解剖和生理上與人非常接近的中國實驗用小型豬腎臟發(fā)育過程中腎小管的形態(tài)學(xué)變化和腎小管各節(jié)段的特異性標(biāo)志物;
　?、萍?xì)胞極性是腎小管上皮細(xì)胞發(fā)揮生理功能的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ),明確成體豬腎小管壞死后修復(fù)過程與胚胎豬腎小管發(fā)育過程中細(xì)胞極性形成過程的一致性。
　　2、方法:
　　⑴采用高碘酸-希夫(PAS)染色和免疫熒光染色技術(shù),系統(tǒng)觀察中國實驗用小型豬妊娠28天-112天(E28d-E112d)和出生后1天

2、、7天、14天、21天(P1d-批21d),共17個不同時間點(diǎn)豬腎小管的發(fā)育及腎小管特異性標(biāo)志物雪蓮花凝集素(LTL)、水通道蛋白1(AQP1)、鈣結(jié)合蛋白(Calbindin-D28k)在腎小管不同節(jié)段的表達(dá);
　?、仆ㄟ^肌肉注射硫酸慶大霉素制作出生后12周雄性中國實驗用小型豬急性腎小管壞死后自然修復(fù)的動物模型,分別在注射慶大霉素10天后第1天、第7天和第14天取血并采集腎臟標(biāo)本,另外采集妊娠42天豬的胚胎腎臟標(biāo)本;采用PAS染

3、色觀察成體豬腎小管壞死后修復(fù)再生過程與胚胎豬腎小管發(fā)育過程中腎小管的形態(tài)學(xué)變化;以Na+-K+-ATP酶作為細(xì)胞極性的標(biāo)志物,PCNA作為新生細(xì)胞的標(biāo)志物,采用免疫熒光和免疫組織化學(xué)染色技術(shù)對比觀察成體豬腎小管壞死后修復(fù)再生過程與胚胎豬腎小管發(fā)育過程中細(xì)胞極性形成的過程。
　　3、結(jié)果:
　?、胖袊鴮嶒炗眯⌒拓iE28d可見后腎間充質(zhì)和輸尿管芽,即后腎已經(jīng)開始發(fā)育;但這時還沒有腎小管。E35d可見不同節(jié)段的腎小管,即腎小管已開

4、始發(fā)育。從E35d到P14d(E112d-E114d仔豬出生),腎皮質(zhì)均有生腎區(qū)存在,即不斷有新的腎單位發(fā)生;P21d生腎區(qū)已消失,即不再有新的腎單位產(chǎn)生。
　?、脾貺TL在E28d表達(dá)在輸尿管芽,E35d開始在近端小管表達(dá),以刷狀緣表達(dá)最為明顯;表達(dá)由弱到強(qiáng),由點(diǎn)狀到線狀。
　?、贏QP1在E28d未見表達(dá),E35d開始表達(dá);AQP1表達(dá)在近端小管和髓袢,主要表達(dá)在細(xì)胞膜,尤其在管腔側(cè)的表達(dá)更為明顯。
　?、跜alb

5、indin-D28k在E28d表達(dá)在輸尿管芽,E35d開始表達(dá)在遠(yuǎn)端小管和集合管;Calbindin-D28k主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì),隨著腎小管發(fā)育,表達(dá)逐漸增強(qiáng)。
　?、窃谥袊鴮嶒炗眯⌒拓i腎小管發(fā)育的研究中,發(fā)現(xiàn)集合管來源于輸尿管芽,發(fā)源于輸尿管芽的集合管從被膜下的生腎區(qū)一直延伸到腎髓質(zhì)。
　?、瘸审w豬注射慶大霉素10天后第1天,腎小管上皮細(xì)胞壞死、脫落,腎小管基底膜裸露,管腔內(nèi)有大量脫落的上皮細(xì)胞碎片;第7天,腎小管基底膜出現(xiàn)

6、新再生的腎小管上皮細(xì)胞;第14天,大多數(shù)腎小管結(jié)構(gòu)恢復(fù)至接近正常。
　?、沙审w豬注射慶大霉素10天后第1天,裸露的腎小管基底膜沒有Na+-K+-ATP酶和PCNA的表達(dá);第7天,新再生的腎小管上皮細(xì)胞PCNA陽性,有Na+-K+-ATP酶的表達(dá),但此時Na+-K+-ATP酶沒有明顯的極性分布,胞膜和胞漿均有表達(dá);第14天,PCNA陽性細(xì)胞Na+-K+-ATP酶呈極性分布,主要表達(dá)在腎小管上皮細(xì)胞的側(cè)基底膜。
　?、逝咛ヘi腎小

7、管發(fā)育過程是從腎小管前體發(fā)育成為不成熟的腎小管,再發(fā)育成為成熟的腎小管。
　?、伺咛ヘi腎小管發(fā)育過程中,Na+-K+-ATP酶的表達(dá)從沒有極性到有極性分布,即Na+-K+-ATP酶從腎小管上皮細(xì)胞的胞膜和胞漿均有表達(dá)到只局限在側(cè)基底膜表達(dá),在這一過程中PCNA均為陽性。
　　4、結(jié)論:
　?、胖袊鴮嶒炗眯⌒拓i妊娠28天腎臟開始發(fā)育,妊娠35天可以見到不同節(jié)段腎小管,P14d-P21d生腎區(qū)消失,不再有新的腎單位形成。<