以自體結(jié)膜成纖維細胞為飼養(yǎng)細胞構(gòu)建組織工程兔角膜上皮.pdf

1、目的：創(chuàng)建一種新的組織工程角膜上皮構(gòu)建系統(tǒng)，以自體結(jié)膜成纖維細胞為飼養(yǎng)細胞，避免異種飼養(yǎng)細胞的介入，用于治療角膜緣干細胞缺乏性疾病。 方法： 以組織塊法體外培養(yǎng)新西蘭白兔結(jié)膜成纖維細胞。使用不同濃度絲裂霉素C37℃下處理培養(yǎng)的新西蘭白兔自體結(jié)膜成纖維細胞(第1-2代)2小時，以MTT比色法檢測絲裂霉素C的毒性，觀察安全劑量范圍內(nèi)絲裂霉素C處理對細胞增殖的抑制作用，選取最適濃度處理兔結(jié)膜成纖維細胞制作飼養(yǎng)細胞。取兔頰部口

2、腔粘膜上皮組織，以人去上皮羊膜上為載體，DMEM:F12(3:1)為基礎(chǔ)培養(yǎng)液，構(gòu)建組織工程角膜上皮(n=8)。觀察兔口腔黏膜上皮細胞的生長、增殖、分化狀況，并對構(gòu)建的組織工程角膜上皮進行組織病理學(xué)和電子顯微鏡檢查。 結(jié)果： 兔結(jié)膜成纖維細胞可耐受濃度≤25μg/ml絲裂霉素C37℃處理2小時。制作飼養(yǎng)細胞的最適合處理濃度為Sμg/ml。兔口腔粘膜上皮細胞于2-4天內(nèi)從組織塊周邊爬出，8-10天左右即可接近融合。融合的細

3、胞呈現(xiàn)典型的上皮樣細胞形態(tài)，細胞大小均一，排列緊密，邊界清晰，呈現(xiàn)鋪路石樣。以兔結(jié)膜成纖維細胞為飼養(yǎng)細胞構(gòu)建的組織工程角膜上皮組織形態(tài)與正常兔角膜上皮相似，呈現(xiàn)為4-5層分化良好的復(fù)層上皮，基底部細胞呈矮柱狀，基底上層是2-3層的翼狀細胞，表層細胞扁平。電子顯微鏡檢查顯示構(gòu)建的組織工程角膜上皮的顯微結(jié)構(gòu)亦與正常兔角膜上皮接近，包括細胞間以大量橋粒連接，基底細胞通過許多半橋粒牢固連接于羊膜以及表層上皮表面有微絨毛樣結(jié)構(gòu)。 結(jié)論：