龍葵堿誘導的反應性氧自由基抑制肝癌細胞生長的機制研究.pdf

1、目的：
　　 以龍葵堿作為一種抑制腫瘤生長的藥物，對肝癌細胞體外作用，通過運用相應的ROS(反應性氧自由基)探針檢測肝癌細胞內ROS含量，WesternBlot方法檢測凋亡和增殖相關蛋白的表達，觀察龍葵堿促進肝癌細胞產生ROS，尤其是H2O2和OH-，并導致腫瘤細胞凋亡的生物學過程，闡明龍葵堿誘導肝癌細胞凋亡的分子生物學機制。
　　 方法：
　　 運用各種不同細胞定位的ROS探針，采用流式細胞術檢測熒光值，檢測肝

2、癌細胞內ROS的含量，WesternBlot檢測凋亡相關蛋白(ASK1、TBP-2)和增殖相關蛋白(TRX2)的含量和活性，并通過倒置顯微鏡觀察龍葵堿作用后肝癌細胞的形態(tài)學改變，行研究組和對照組計數(shù)比較。
　　 結果：
　　 ROS探針DCFDA和DHR123檢測到了龍葵堿預處理之后的肝癌細胞胞漿和線粒體中均存在豐富的ROS(包括OH-，H2O2)，與空白對照相比均有顯著性差異(p<0.05)；而O-2特異性的探針DHE

3、和MITSOX，檢測龍葵堿預處理之后產生的ROS(即O-2)，與空白對照相比均無顯著性差異(p>0.05)；WesternBlot實驗結果發(fā)現(xiàn)，龍葵堿上調了凋亡相關蛋白ASK1、TBP-2的表達和活性，而抑制了增殖相關蛋白TRX2的表達；計數(shù)實驗發(fā)現(xiàn)，龍葵堿顯著抑制肝癌細胞的生長，隨著龍葵堿濃度增加和作用時間延長，肝癌細胞變圓、皺縮、漂浮并破碎，死亡細胞逐漸增加，存活細胞數(shù)量明顯減少。
　　 結論：
　　 (1)龍葵堿誘