9型腺相關(guān)病毒介導R65核酶基因靶向轉(zhuǎn)導干預(yù)動脈粥樣硬化的研究.pdf

1、目的:以重組9型腺相關(guān)病毒(rAAV9)為載體介導R65核酶基因轉(zhuǎn)導ApoE-/-小鼠，觀察是否能抑制主動脈NF-κB信號通路表達，進而減輕炎癥反應(yīng)，防治動脈粥樣硬化的發(fā)生。
　　方法:
　　(1)8周齡ApoE-/-小鼠分別給予高脂飲食和普通飲食8，12，16，20，24周后，檢測血脂表達情況，油紅O染色觀察斑塊面積表達，Western blot檢測高脂飲食組主動脈中NF-κB信號通路P65和P50的表達。
　　(2

2、)8周齡ApoE-/-小鼠高脂飲食喂養(yǎng)16周后，于14，21，28，35，60天留取主動脈組織，激光共聚焦顯微鏡和Western blot檢測主動脈中eGFP的表達。
　　(3)8周齡ApoE-/-小鼠尾靜脈分別注射rAAV9-eGFP和rAAV9-eGFP-R65，同時給予高脂飲食，16周后測定血脂水平，大體油紅O染色檢測斑塊面積表達，Western blot檢測NF-κB信號通路P65和P50的表達，ELISA檢測炎癥因子TN

3、F-α和IL-6的表達。
　　結(jié)果:
　　(1)血脂檢測結(jié)果顯示高脂飲食組總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL-C)水平顯著高于普通飲食組，油紅O染色結(jié)果顯示高脂飲食組形成斑塊病變比普通飲食組更快，并可有效激活NF-κB信號通路。
　　(2)激光共聚焦顯微鏡和Western blot結(jié)果顯示rAAV9-eGFP可有效轉(zhuǎn)染主動脈血管,eGFP的表達高峰在第35天。
　　(3)血清學和油紅O染色結(jié)

4、果顯示轉(zhuǎn)導rAAV9-eGFP-R65可減輕血脂水平和斑塊表達。Western blot結(jié)果顯示采用高脂飲食16周后可有效激活NF-κB信號通路，且轉(zhuǎn)染rAAV9-eGFP-R65后可抑制NF-κB信號通路的活性。ELISA結(jié)果顯示，rAAV9-eGFP-R65轉(zhuǎn)染后可有效減輕炎癥因子TNF-α和IL-6表達。
　　結(jié)論:高脂飲食可以加快動脈粥樣硬化的病理進程，并有效激活NF-κB信號通路，16周時可形成穩(wěn)定的動脈粥樣硬化模型。r