Hippo通路對口蝦蛄乙酸乙酯提取物抑制鼻咽癌生長機(jī)制研究.pdf

1、[目的]：
　　研究Hippo通路蛋白在人鼻咽癌的功能表達(dá)及其在口蝦蛄乙酸乙酯提取物(EOS)抑制人鼻咽癌細(xì)胞株CNE1及CNE1-GL生長中的作用。
　　[方法]：
　　1.免疫組化染色法檢測YAP蛋白在人鼻咽癌組織及正常鼻咽黏膜組織中的表達(dá);
　　2.Western Blot檢測YAP蛋白在人永生化鼻咽上皮細(xì)胞系NP69細(xì)胞及人鼻咽癌細(xì)胞株CNE1、CNE1-GL、CNE2、SUNE1-和HONE-1細(xì)胞中的

2、表達(dá)水平;
　　3.Western Blot檢測Hippo通路抑制劑溶血磷脂酸(LPA)不同時間段作用于人鼻咽癌細(xì)胞株CNE2后p-YAP的蛋白表達(dá)變化;
　　4.MTT比色法檢測不同濃度EOS對人鼻咽癌細(xì)胞株CNE1及CNE1-GL細(xì)胞的生長抑制作用;
　　5.流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度EOS對人鼻咽癌細(xì)胞株CNE1及CNE1-GL細(xì)胞周期的影響;
　　6.Western Blot檢測不同濃度EOS作用人鼻咽癌細(xì)胞

3、株CNE1及CNE1-GL細(xì)胞后YAP、p-YAP及survivin蛋白的表達(dá)情況。
　　[結(jié)果]：
　　1.YAP蛋白在正常鼻咽黏膜組織弱陽性，主要表達(dá)于黏膜基底層，而在鼻咽癌組織中，主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞;
　　2.YAP蛋白在不同鼻咽部細(xì)胞株中的表達(dá)差異性表達(dá):YAP蛋白在正常永生化上皮細(xì)胞NP69細(xì)胞中表達(dá)較最弱，CNE1-GL細(xì)胞YAP表達(dá)水平高于CNE1，低分化鼻咽癌細(xì)胞株CNE2細(xì)胞中表達(dá)最強(qiáng);
　　3

4、.LPA可誘導(dǎo)YAP去磷酸化，從而抑制Hippo信號通路，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展;
　　4.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果，隨著EOS藥物濃度的增加，細(xì)胞株CNE1及CNE1-GL的細(xì)胞增殖能力明顯下降;
　　5.流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，隨著EOS藥物濃度的增加，CNE1阻滯于S期，CNE1-GL細(xì)胞阻滯于G1期;
　　6.不同濃度EOS處理人鼻咽癌細(xì)胞株CNE1及CNE1-GL細(xì)胞后，Western Blot結(jié)果顯示，EOS誘導(dǎo)p-YA

5、P蛋白表達(dá)升高，survivin蛋白表達(dá)下降。
　　[結(jié)論]：
　　1.YAP蛋白在鼻咽癌組織及細(xì)胞中的表達(dá)顯著高于正常，說明YAP蛋白與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān);
　　2.EOS可抑制人鼻咽癌細(xì)胞株CNE1及CNE1-GL細(xì)胞增殖能力，并具有明顯的量-效關(guān)系;
　　3.EOS可能通過影響人鼻咽癌細(xì)胞株CNE1及CNE1-GL細(xì)胞的周期分布，抑制細(xì)胞的增殖;
　　4.EOS能夠誘導(dǎo)p-YAP蛋白表達(dá)升高，降低s