慢性應(yīng)激抑制大鼠基底外側(cè)杏仁核5-HT2受體介導(dǎo)的長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng).pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)采用慢性不可逃脫電擊方式建立慢性應(yīng)激大鼠模型。以基底外側(cè)杏仁核為研究的切入點(diǎn)，運(yùn)用電生理、分子生物學(xué)以及行為學(xué)技術(shù)，探討慢性應(yīng)激模型大鼠基底外側(cè)杏仁核5-HT2受體介導(dǎo)的長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)是否發(fā)生改變及其機(jī)制，本研究將有助于為焦慮、恐懼和創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙等杏仁核介導(dǎo)的應(yīng)激所致的情緒情感異常提供新的治療思路。
　　方法①杏仁核腦片的制備：大鼠麻醉后快速取出腦部組織，置于低溫氧氣飽和的人工腦脊液中，將含有杏仁核部分的腦組

2、織切成厚度為500μm的腦片。②腦片場(chǎng)電位的記錄：在解剖顯微鏡下將刺激電極置于杏仁核的外囊上，記錄微電極放置于杏仁核的基底外側(cè)區(qū)，其尖端置于腦片表面下約200μm處。應(yīng)用RM6240系統(tǒng)刺激外囊，并記錄其場(chǎng)電位。③STE/LTP的誘導(dǎo)：應(yīng)用單串θ頻率波刺激（TBS）誘導(dǎo)突觸可塑性，每串TBS刺激為20個(gè)短時(shí)間高頻脈沖刺激，強(qiáng)度同常規(guī)刺激強(qiáng)度。④行為學(xué)實(shí)驗(yàn)：慢性應(yīng)激模型：大鼠每天固定時(shí)間給予兩次40min隨機(jī)足底部電刺激（每分鐘有15s隨

3、機(jī)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行電擊，電擊電流0.8mA），按照上述方式持續(xù)5天。應(yīng)激結(jié)束后進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)及水迷宮實(shí)驗(yàn)。⑤藥物干預(yù)：分別在人工腦脊液中加入DOI（5-HT2受體激動(dòng)劑）、ritanserin(5-HT2A/2C受體拮抗劑）等，觀察5-HT2受體介導(dǎo)的長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)是否發(fā)生變化。⑥Western blot:檢測(cè)大鼠杏仁核5-HT2A、5-HT2C、PKC蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果①正常組5-HT2受體激動(dòng)劑DOI對(duì)BLA的突觸可塑性有顯著的易

4、化作用（p<0.05）。②5-HT2A/2C拮抗劑 ritanserin能有效阻斷 DOI對(duì) LTP的易化作用（p<0.05），提示在DOI的作用下，TBS誘導(dǎo)的LTP為5-HT2A/2C受體介導(dǎo)的。③曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)顯示慢性應(yīng)激組大鼠探究行為變少且有較明顯的焦慮（p<0.05），但水迷宮實(shí)驗(yàn)顯示慢性應(yīng)激對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶無(wú)顯著改變（p>0.05）。④慢性應(yīng)激抑制5-HT2A/2C受體介導(dǎo)的LTP。⑤Western blot:慢性應(yīng)激大鼠杏仁核5-