水牛奶酪蛋白抗菌肽的制備與研究.pdf

1、本試驗(yàn)主要探討水牛奶酪蛋白抗菌肽的制備及其穩(wěn)定性的研究。試驗(yàn)由分為四部分：水牛奶中提取酪蛋白、酪蛋白酶解工藝的研究、抗菌肽的粗分離和抗菌肽穩(wěn)定性的研究，研究結(jié)果如下：
　　 (1)從水牛奶中提取出的酪蛋白含量占水牛奶總蛋白含量的78.33％。通過(guò)雙縮脲法繪制出標(biāo)準(zhǔn)酪蛋白的標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)出酪蛋白樣品純度達(dá)到93.37％，純度比較高，可以作為酶解工藝的原料。
　　 (2)通過(guò)抑菌試驗(yàn)確定胃蛋白酶為最適合制備抗菌肽的試驗(yàn)用酶。通

2、過(guò)單因素試驗(yàn)，考察PH值、酶解時(shí)間、酶解溫度、[E]/[S]對(duì)酶解反應(yīng)的影響，得出適宜的酶解條件為：PH值為2.5、酶解時(shí)間為3h、[E]/[S]為3％、酶解溫度為40℃．在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，確定正交試驗(yàn)的因素水平，通過(guò)正交試驗(yàn)確定了[E]/[S]是制備酪蛋白抗菌肽的顯著影響因子，制備酪蛋白抗菌肽的最佳酶解條件為：溫度為40℃，酶解時(shí)間為4h，[E]/[S]為4％，PH值為3.0。
　　 (3)用截留分子量為5KDa超濾膜對(duì)酶

3、解液進(jìn)行粗分離，在操作溫度為35℃、操作時(shí)間為60min、操作壓力為0.07MPa時(shí)能夠達(dá)到較好的分離效果。在此條件下分離抗菌肽，濾液進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，兩種細(xì)菌的抑菌圈直徑分別達(dá)到了1.58cm和1.54cm，表明具有抗菌作用的多肽物質(zhì)主要集中在截留分子量為5KDa的濾液中。
　　 (4)將超濾后的抗菌肽凍干物配制成不同濃度的樣品溶液，通過(guò)抑菌試驗(yàn)確定20mg·mL-1為抗菌肽樣品的最合適濃度。抗菌肽在PH值變化下穩(wěn)定，其中抗菌肽溶