JNK信號轉(zhuǎn)導通路在高氧肺損傷中的作用.pdf

1、目的:高氧機械通氣治療是臨床中搶救危重病人最有效的方法之一，然而長時間持續(xù)吸入高濃度氧可導致肺氧化應激性損傷，目前對高氧肺損傷的發(fā)病機制尚未完全清楚，因而臨床上尚無確定有效的防治方法。高氧肺損傷的一個重要組織學特點是細胞凋亡。c-Jun氨基末端激酶(C-Jun NH<,2>-terminal kinase，JNK)信號轉(zhuǎn)導通路是絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein Nnase，MAPKs)家族中的重要通

2、路之一，對細胞的凋亡調(diào)節(jié)發(fā)揮著重要作用。本課題采用幼鼠建立高氧肺損傷動物模型，觀察高氧下肺組織細胞凋亡及JNK信號轉(zhuǎn)導通路激活的時空分布特征，并探討JNK信號通路對高氧誘導的肺細胞凋亡的影響，從而研究JNK信號轉(zhuǎn)導通路在高氧肺損傷中的作用。 方法: 3 周Wistar大鼠48只采用隨機圖標法分為6組，每組8只：空氣對照組、高氧暴露3天組、高氧暴露7天組、高氧暴露14天組、空氣+SP600125干預組、高氧暴露7天+SP60012

3、5干預組。高氧組持續(xù)吸入高濃度氧(O<,2>>95％)，空氣對照組置于室內(nèi)空氣中(O<,2>≈21％)。SP600125干預組動物經(jīng)腹腔注射SP600125 30mg/kg，2h后再予高氧或空氣暴露。采用肉眼及蘇木精和伊紅(Hematoxylin and eosin，HE)染色光鏡下觀察肺組織病理學變化，末端標記法(Terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick end la

4、beling，TUNEL)分析肺組織細胞凋亡的變化，免疫組化檢測肺組織磷酸化-JNK (p-JNK)的表達和分布，蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot)檢測肺組織p-JNK蛋白質(zhì)的含量。 結(jié)果:肺組織病理學改變表現(xiàn)為高氧3天時肺組織充血、水腫、出血和炎性細胞浸潤，高氧7天時上述改變更加明顯，高氧14天時則肺組織充血水腫減輕，間質(zhì)增厚，成纖維細胞增生明顯。TUNEL 分析表明空氣對照組肺組織中少見凋亡細胞，而高氧暴露3天、7

5、天、14天組肺組織中可見大量的凋亡細胞(P<0.05)，尤以高氧暴露3、7天明顯；凋亡細胞以肺泡上皮細胞、小氣道上皮細胞及血管內(nèi)皮細胞為主，部分巨噬細胞、間質(zhì)細胞、浸潤的炎癥細胞也呈凋亡改變。免疫組化結(jié)果提示空氣對照組偶有少量p-JNK陽性表達，而高氧暴露組則p-JNK陽性表達顯著增多，以高氧7天組增多最為明顯；陽性細胞廣泛分布于肺泡上皮細胞、小氣道上皮細胞、血管內(nèi)皮細胞、巨噬細胞、間質(zhì)細胞以及浸潤炎癥細胞。Western blot結(jié)果

6、顯示空氣對照組僅有少量p-JNK蛋白表達，高氧暴露3天、7天、14天組p-JNK蛋白表達含量明顯增加(P<0.05)，以在高氧7天組增加最為明顯。在空氣和高氧暴露7天，SP600125干預后肺組織p-JNK蛋白表達含量較相應未干預組均出現(xiàn)明顯抑制(P<0.05)，且在高氧暴露7天，SP600125干預后顯著減少了肺組織細胞的凋亡(P<0.05)。 結(jié)論: 1．我們成功復制出高氧性肺損傷動物模型。 2．高氧在肺損傷