模擬HCV HVR1免疫7肽對人不同免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞因子影響的初步研究.pdf

1、目前針對慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染尚無切實有效的辦法，以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫為主的HCV治療新疫苗，可通過重建感染者針對HCV的免疫應(yīng)答，調(diào)動自身的免疫機(jī)能來清除病毒，減少非特異性炎癥對肝臟的損害的作用。有可能是將來治療慢性HCV感染的重要方法。本研究的課題是建立在我室長期對中國人群常見的HCV感染毒株(1b、2a)包膜蛋白E2高變區(qū)1(HVR1)序列變異規(guī)律的研究基礎(chǔ)上，根據(jù)保守位點(diǎn)合成的一系列長度不等的HCVHVR1模擬表位。之

2、前的研究中，已經(jīng)驗證了其中一個含有7個氨基酸的多肽(7P)能夠誘導(dǎo)小鼠免疫應(yīng)答。本課題主要是在此基礎(chǔ)上，針對人不同免疫細(xì)胞，研究7P對人不同免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響，并初步探討其機(jī)制。課題共分為三個部分。 (一)7P對正常人免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響 將7P與正常人的外周血單核細(xì)胞((PBMCs)共同孵育培養(yǎng)，然后通過檢測免疫細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子分泌的改變來研究其免疫變化。結(jié)果表明，應(yīng)用7P刺激正常人PBMCs后，分泌IFN

3、-Y的細(xì)胞頻數(shù)無論在NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞以及CD4+CD8-、CD4-CD8+T淋巴細(xì)胞均明顯增高；而分泌IL-4的細(xì)胞頻數(shù)則變化不明顯。分泌IL-10的細(xì)胞頻數(shù)在CD4+CD8-、CD4-CD8+T淋巴細(xì)胞表現(xiàn)為升高，在NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞表現(xiàn)為下降；而分泌TNF-α的細(xì)胞頻數(shù)在CD4+CD8-、CD4-CD8+T淋巴細(xì)胞表現(xiàn)為下降，在NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞表現(xiàn)為升高。 (二)7P刺激免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞因子改變的初步研究

4、首先將7P與正常人的外周血單核細(xì)胞((PBMCs)共同孵育培養(yǎng)，然后檢測抗原呈遞細(xì)胞(DC)成熟及細(xì)胞因子變化情況。結(jié)果表明應(yīng)用7P刺激DC細(xì)胞時，成熟細(xì)胞表型的mDC細(xì)胞的頻數(shù)明顯下降：成熟的細(xì)胞表型的pDC細(xì)胞的頻數(shù)未發(fā)生變化，代表mDC分泌功能的IL-12未能檢測出來。提示7P體外刺激有可能夠降低成熟mDC的表達(dá)，未能促進(jìn)IL-12的分泌；但對pDC表達(dá)的影響尚不完全明確。其后采用細(xì)胞分選技術(shù)，將抗原提呈細(xì)胞從PBMCs中分離出去

5、，剩余的成分中包括免疫反應(yīng)的效應(yīng)細(xì)胞T細(xì)胞和NK、NKT細(xì)胞，將其和7P共同孵育培養(yǎng)后檢測細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色。結(jié)果表明，當(dāng)應(yīng)用磁珠分選之后其與7P共同孵育培養(yǎng)，能夠得到與分選之前基本相同的結(jié)果。提示7P的這種對細(xì)胞因子分泌的調(diào)節(jié)可能是直接作用于效應(yīng)細(xì)胞，同時對于抗原提呈細(xì)胞(DC)也具有直接或間接的作用，而這種作用也可能間接地影響效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌。 (三)7P對HCV感染患者免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞因子影響的初步研究 將H