高純度低聚果糖單組分的凝膠層析制備和結(jié)構(gòu)表征及其應(yīng)用研究.pdf

1、低聚果糖(fructooligosacchrides，F(xiàn)OS)是由蔗果三糖(GF2)、蔗果四糖(GF3)、蔗果五糖(GF4)和蔗果六糖(GF5)等組分組成的混合物，低聚果糖具有促進(jìn)人體和動(dòng)物腸道雙歧桿菌生長(zhǎng)等生理功能，是一種公認(rèn)的功能性低聚糖，廣泛地應(yīng)用于保健食品和飼料添加劑行業(yè)。
　　 在低聚果糖的HPLC分析中需要其單組分的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行定性和定量，這種標(biāo)準(zhǔn)品目前只能從國(guó)外進(jìn)口，價(jià)格昂貴，國(guó)內(nèi)FOS生產(chǎn)企業(yè)無(wú)法使用。本論文的目的

2、就是為了解決采用HPLC--外標(biāo)法測(cè)定低聚果糖含量時(shí)需要標(biāo)準(zhǔn)品的問(wèn)題而立項(xiàng)的。
　　 本文以聚丙烯酰胺凝膠為層析介質(zhì)，以脫氣超純水為洗脫劑，研究了Bio-GelP-2柱層析分離低聚果糖混合樣品的特性，探討了層析條件對(duì)分離效果的影響。在最佳層析條件下批量制備了低聚果糖單組分，并進(jìn)行了定性定量分析和結(jié)構(gòu)鑒定。
　　 Bio-GelP-2柱層析分離低聚果糖的特性研究表明：有效分配系數(shù)的負(fù)對(duì)數(shù)-logKav與分子量呈線性關(guān)系，各

3、組分分子量是影響層析的主要因素，各組分與Bio-GelP-2之間無(wú)特異性吸附現(xiàn)象，層析過(guò)程中完全是按照相對(duì)分子量的大小進(jìn)行的研究表明，采用Empower系統(tǒng)為層析平臺(tái)，最佳層析條件是：以ф1.6x100cm夾套柱為層析柱，柱溫40℃，柱床高度95cm，上樣量0.5mL（樣液濃度0.40g-mL-1），洗脫速度0.20mL.min-1，洗脫液自動(dòng)收集，并分流至HPLC的蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)在線檢測(cè)，可以實(shí)現(xiàn)高純度的低聚果糖單組分的

4、層析制備。
　　 經(jīng)高效液相色譜(HPLC)、電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)和核磁共振(NMR)分析所制備的低聚果糖單組分為蔗果三糖(1-Kestose)、蔗果四糖(1，1-Kestotetraose)、蔗果五糖(1，1，1-Kestopentaose)，與Megazlaae（愛(ài)爾蘭）公司標(biāo)準(zhǔn)品的結(jié)構(gòu)一致，其純度分別為99.33％、99.94％和99.91％，可以作為HPLC分析的標(biāo)準(zhǔn)品使用。
　　 本實(shí)驗(yàn)所制備的低聚果糖單