裙帶菜中巖藻黃質(zhì)、巖藻多糖的綜合提取純化研究.pdf

1、裙帶菜屬于褐藻門翅藻科植物，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，可藥食同用，是海洋主要經(jīng)濟(jì)藻類之一，在我國(guó)資源十分豐富。巖藻黃質(zhì)屬于類胡蘿卜素中的葉黃素類脂溶性色素，巖藻多糖是一種含巖藻糖的硫酸酯雜多糖，二者都具有多樣的生理功能，都是裙帶菜中極其重要的生物活性物質(zhì)，具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。目前國(guó)內(nèi)對(duì)裙帶菜的研究不多，主要集中于其蛋白質(zhì)、纖維素等營(yíng)養(yǎng)成分開發(fā)利用方面，對(duì)巖藻黃質(zhì)、巖藻多糖的提取利用涉及相對(duì)較少。
　　本論文對(duì)產(chǎn)自浙江舟山群島地區(qū)的裙帶菜進(jìn)行了研

2、究，試圖對(duì)其重要活性成分巖藻黃質(zhì)、巖藻多糖等進(jìn)行綜合提取利用，并對(duì)藻類物質(zhì)所固有的砷含量極高的問(wèn)題進(jìn)行了脫砷方法摸索，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　建立巖藻黃質(zhì)和巖藻多糖中巖藻糖含量的HPLC檢測(cè)方法，通過(guò)色譜峰分離度、標(biāo)準(zhǔn)曲線、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、加樣回收實(shí)驗(yàn)等多方面綜合考察，顯示兩種檢測(cè)方法中各分析組分均可達(dá)到良好的基線分離，峰形勻稱，無(wú)干擾，專屬性好，結(jié)果穩(wěn)定，準(zhǔn)確度高。同時(shí)，該檢測(cè)方法也可為當(dāng)前良莠不齊的市場(chǎng)產(chǎn)品質(zhì)量提供參考性檢測(cè)依據(jù)和

3、標(biāo)準(zhǔn)。
　　從裙帶菜中提取分離巖藻黃質(zhì)，分析單因素實(shí)驗(yàn)因素，并通過(guò)正交試驗(yàn)對(duì)提取條件進(jìn)行優(yōu)化。最終確定預(yù)處理后的裙帶菜原料，加入12倍的提取溶液，95％丙酮浸提2.5h，提取三次，效果較好。提取后的浸提液經(jīng)超濾除渣，用硅膠柱層析做進(jìn)一步的分離純化，最終巖藻黃質(zhì)產(chǎn)品純度可由原來(lái)的2.31％提取到24.2％，回收率達(dá)90.9％。
　　從裙帶菜中提取分離巖藻多糖，分析單因素實(shí)驗(yàn)因素，同樣以正交試驗(yàn)進(jìn)行提取條件的優(yōu)化。最終確定預(yù)處理

4、后的裙帶菜原料，加入10倍量的pH2.0提取溶液，95℃水浴浸提2.5h，三次，效果較好。巖藻多糖去蛋白方法以酶解法效果較好;脫色方法綜合考慮，采用AB-8大孔樹脂吸附較好。進(jìn)一步純化可采用乙醇分級(jí)醇沉、DEAE-Cellulose柱層析純化等方式。
　　比較常溫（檸檬酸）水浸泡對(duì)裙帶菜原料中重金屬砷含量的去除效果，最終確定以pH3.0檸檬酸水浸泡過(guò)夜（約10h），中間更換溶劑3次，即每浸泡3h更換檸檬酸水1次，原料中砷含量可由處

5、理前128.6ppm降到9.2ppm，去除率達(dá)92.8％。效果顯著，操作方式也極其簡(jiǎn)單。
　　LSA-AS螯合樹脂對(duì)檸檬酸水預(yù)處理后的裙帶菜浸提液進(jìn)行進(jìn)一步除砷處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示LSA-AS樹脂可將巖藻黃質(zhì)浸取物由上柱前的6.8ppm降低到0.7ppm，砷去除率為89.7％;同樣，對(duì)于巖藻多糖萃取物，砷含量由7.3ppm降低到0.9ppm，除砷率為87.7％。經(jīng)由檸檬酸水常溫浸泡預(yù)處理和LSA-AS螯合樹脂后處理，兩道脫砷工序結(jié)合

6、，冷凍干燥，終產(chǎn)品巖藻黃質(zhì)0.7ppm和巖藻多糖0.9ppm的砷含量也完全符合《中國(guó)藥典》和市場(chǎng)對(duì)這兩個(gè)產(chǎn)品的質(zhì)控要求。
　　整合巖藻黃質(zhì)、巖藻多糖兩個(gè)成分的提取純化路線及脫砷工藝，確定裙帶菜主要活性成分綜合提取利用的最終工藝流程，即裙帶菜水洗去鹽漬后，pH3.0檸檬酸水浸泡過(guò)夜，加入10倍量的pH2.0酸水溶液，95℃水浴浸提2.5h，三次，分別收集濾液和濾渣;濾液部分分別經(jīng)過(guò)酶解去蛋白、AB-8樹脂脫色、LSA-AS樹脂脫砷、

7、乙醇分級(jí)醇沉、DEAE-Cellulose柱層析純化等方式，制備巖藻多糖;而濾渣經(jīng)陰干后，加入12倍的丙酮溶液浸提2.5h，提取兩次，LSA-AS樹脂脫砷、硅膠柱層析純化等工藝，可同時(shí)制備巖藻黃質(zhì)。
　　進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，巖藻黃質(zhì)提取率為0.074％，巖藻多糖為3.94％，每100g裙帶菜可提取巖藻黃質(zhì)0.30g，HFLC含量為24.6％，砷含量為0.7ppm。同時(shí)，每100g裙帶菜可提取巖藻粗多糖4.48g，其中總多糖含量為87.5