產(chǎn)朊假絲酵母聯(lián)產(chǎn)發(fā)酵生產(chǎn)S-腺苷蛋氨酸和谷胱甘肽研究.pdf

1、S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)和谷胱甘肽(Glutathione,GSH)均是生物體內(nèi)重要的含硫類小分子活性物質(zhì),分別在轉(zhuǎn)甲基、轉(zhuǎn)硫、轉(zhuǎn)氨丙基和維持細(xì)胞正常的氧化還原水平、細(xì)胞解毒等方面發(fā)揮關(guān)鍵作用,在醫(yī)藥、化妝品、保健品行業(yè)都有著廣泛的應(yīng)用。
　　 本文對產(chǎn)朊假絲酵母Candida utilis中SAM和GSH的聯(lián)產(chǎn)情況進(jìn)行了研究,內(nèi)容主要包括三個方面:聯(lián)產(chǎn)菌株的誘變篩選、突變株最適

2、聯(lián)產(chǎn)發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的統(tǒng)計學(xué)方法優(yōu)化(搖瓶水平)及5L發(fā)酵罐水平上SAM/GSH聯(lián)產(chǎn)發(fā)酵條件探索。通過認(rèn)真細(xì)致的研究工作,得到了以下主要結(jié)論:
　　 1.對出發(fā)菌株C.utilis SZU07-01進(jìn)行兩輪紫外線誘變和一輪γ射線誘變,并通過選擇性培養(yǎng)基(含1g/LL-蛋氨酸,0.5g/L乙硫氨酸,及2g/L NaHSO3的YPD培養(yǎng)基)進(jìn)行分離培養(yǎng)后,篩選獲得一株可聯(lián)產(chǎn)SAM和GSH的高效正突變菌株C.utilisγ21,中

3、國專利菌種保藏中心保藏編號為CCTCC M209298。搖瓶發(fā)酵結(jié)果顯示,其SAM和GSH產(chǎn)量分別達(dá)到324.0 mg/L和220.5 mg/L,較出發(fā)菌株分別提高了131.4％和26.0％,而且該菌株經(jīng)連續(xù)傳代10次后,遺傳性狀穩(wěn)定,具有良好的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用前景。
　　 2.響應(yīng)面法優(yōu)化結(jié)果顯示,SAM和GSH聯(lián)產(chǎn)最適發(fā)酵培養(yǎng)基為:蔗糖35.4g/L,(NH4)2SO410g/L,KH2PO412.3g/L,MgSO4·7H2O0

4、.05g/L,CaCl20.05g/L,和L-蛋氨酸4.6g/L,優(yōu)化培養(yǎng)基條件下,二者聯(lián)產(chǎn)量達(dá)到589.3 mg/L。正交試驗結(jié)果表明,二者聯(lián)產(chǎn)最適條件為:溫度33℃,搖床轉(zhuǎn)速200 rpm,pH6.5,搖瓶裝液量40 ml/500 mL,驗證試驗結(jié)果表明,在該最適條件下,SAM和GSH聯(lián)產(chǎn)量達(dá)到630mg/L,較優(yōu)化前提高了15.7％。3.5 L發(fā)酵罐放大實驗結(jié)果顯示,最適條件為:溫度30℃,pH5.0,起始攪拌轉(zhuǎn)速450rpm,控