改進(jìn)溶膠-凝膠法和吸附法固定化醇脫氫酶的研究.pdf

1、傳統(tǒng)溶膠-凝膠(sol-gel)法進(jìn)行酶的固定化具有酶活損失大和傳質(zhì)阻力大的缺點(diǎn).該文以聚乙二醇(PEG)為多功能試劑對(duì)傳統(tǒng)sol-gel過(guò)程進(jìn)行改進(jìn),以提高固定化甲醇脫氫酶(ADH)的活性.以PEG為模板劑修飾凝膠,使凝膠的孔徑由7.8nm增大到9.3nm,比表面積也由463m<'2>.g<'-1>增加到534m<'2>.g<'-1>,底物在凝膠孔中的有效擴(kuò)散系數(shù)提高到原來(lái)的1.4倍.用修飾后的凝膠固定化的ADH的活性比傳統(tǒng)凝膠固定化

2、的ADH的活性高.此外,利用活化PEG(SC-PEG)為修飾劑對(duì)ADH進(jìn)行修飾,以提高ADH在固定化后的活性,ADH的修飾度約90％.對(duì)修飾后的ADH進(jìn)行固定化,ADH的活性比未經(jīng)修飾的ADH的活性有明顯提高.由甲醛轉(zhuǎn)化為甲醇的酶促反應(yīng)比較兩條提高酶活途徑下的四種固定化的ADH的活性:未修飾凝膠固定化修飾ADH(固定化ADHⅢ)活性>修飾凝膠固定化修飾ADH(固定化ADHⅣ)活性>修飾凝膠固定化未修飾ADH(固定化ADHⅡ)活性>傳統(tǒng)固

3、定化方法下的ADH(固定化ADH Ⅰ)活性.而且固定化ADHⅡ、ADHⅢ、ADHⅣ的穩(wěn)定性均高于固定化ADH Ⅰ的穩(wěn)定性.可見(jiàn)凝膠的修飾以及ADH的修飾均可提高固定化ADH的活性和穩(wěn)定性,但是ADH的修飾較凝膠的修飾對(duì)提高ADH的活性效果明顯.另外,為了比較吸附法與傳統(tǒng)sol-gel包埋法固定化ADH的優(yōu)劣,對(duì)兩種方法固定化的ADH的活性進(jìn)行了比較.采用大孔硅膠對(duì)ADH進(jìn)行吸附,得到吸附動(dòng)力學(xué)曲線和吸附等溫線,ADH在硅膠上的吸附等溫線