波紋巴非蛤糖胺聚糖抗氧化與降血脂活性研究.pdf

1、波紋巴非蛤Paphia(Paratapes)undulata(Born)是南海分布廣泛的一種海產(chǎn)貝類,本論文以波紋巴非蛤?yàn)樵?從波紋巴非蛤中提取、分離、純化得到波紋巴非蛤糖胺聚糖,分析測(cè)定波紋巴非蛤糖胺聚糖主要化學(xué)組分含量,在此基礎(chǔ)上對(duì)其抗氧化、降血脂活性進(jìn)行初步的研究,也為有效開發(fā)和利用波紋巴非蛤資源提供理論依據(jù),具有重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。主要內(nèi)容與結(jié)論包括以下四個(gè)部分:
　　 1.優(yōu)化波紋巴非蛤糖胺聚糖的提取工藝:在單

2、因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,選擇提取水料比、酶解時(shí)間以及酶添加量為自變量,糖胺聚糖提取率為響應(yīng)值,采用中心組合設(shè)計(jì)的方法,研究各自變量及其交互作用對(duì)糖胺聚糖提取率的影響。利用SAS和響應(yīng)面分析相結(jié)合的方法,模擬得到二次多項(xiàng)式回歸方程的預(yù)測(cè)模型。優(yōu)化出酶解法提取糖胺聚糖的最佳條件為:水料比2.5:1、酶解時(shí)間3.5h、酶的添加量1(g/100g)。在此條件下,糖胺聚糖提取率可達(dá)到0.413％;
　　 2.在最優(yōu)條件下大量制備糖胺聚糖粗品(PU

3、G),通過(guò)等電點(diǎn)除蛋白后,進(jìn)行超濾脫鹽獲得精制品(PUG-1),并采用DEAE-52-纖維素離子交換柱層析法對(duì)精制品進(jìn)行純化,分離出來(lái)的兩個(gè)級(jí)分(PUG-1a,PUG-1b),檢測(cè)粗品,精制品和純品中的糖胺聚糖及組成成分,PUG、PUG-1、PUG-1a、PUG-1b測(cè)定結(jié)果:總糖含量為16.4％、19.2％、25.4％、22.4％；總蛋白質(zhì)含量為28.7％、19.8％、10.3％、9.4％；總糖胺聚糖含量為31.4％、46.7％、68

4、.3％、62.8％;硫酸基含量為3.3％、5.6％、11.5％、15.2％;氨基半乳糖含量為3.4％、5.7％、10.7％、12.5％；己糖醛酸含量為9.5％、7.7％、15.2％、13.7％；氨基己糖含量為13.3％、20.6％、31.7％、35.1％。用高效凝膠過(guò)濾色譜(HPSEC)對(duì)純化品進(jìn)行分子量測(cè)定,兩個(gè)級(jí)分分子量大約為30000Da和10000Da；采用紅外光譜法分析純品的各級(jí)分基團(tuán)和結(jié)構(gòu)等。得出兩個(gè)極分基團(tuán)吸收峰有明顯的不

5、同,第一級(jí)分主要含有的單體是吡喃單體；第二級(jí)分含有較多的硫酸基和羧基,且含有α-糖苷鍵特征吸收；兩個(gè)極分都具有酸性多糖的特征吸收。
　　 3.體外抗氧化活性選用清除羥基自由基能力、超氧陰離子自由基能力、DPPH自由基能力三個(gè)指標(biāo)。當(dāng)PUG-1濃度達(dá)到6mg/mL時(shí),對(duì)·OH的清除率最高,為55.4％;試驗(yàn)結(jié)果也顯示,PUG和PUG-1的濃度小于5ml/mL的范圍內(nèi)與O2-·清除率都呈正向關(guān)系,PUG-1對(duì)O2-·清除率最高可達(dá)到

6、68.7％；在清除DPPH自由基的試驗(yàn)結(jié)果表明,PuG-1濃度達(dá)到7mg/mL時(shí),清除率最高,達(dá)到62％。可見(jiàn)波紋巴非蛤糖胺聚糖表現(xiàn)出很好的清除自由基效果。
　　 體內(nèi)抗氧化試驗(yàn)是用D-半乳糖所致衰老模型小鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,灌胃給予PUG-1100,200,400 mg/kg·d,4周后檢測(cè)其對(duì)小鼠血清、肝臟、腦組織中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、過(guò)氧化氫酶(CAT)含量的影響。結(jié)

7、果表明,PUG-1對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)無(wú)影響;PUG-1中、高劑量組血清的SOD和CAT含量顯著高于模型組(P<0.01),高劑量組小鼠血清、肝和腦組織的SOD、GSH-Px、CAT含量均顯著高于模型組(P<0.01)；給藥組小鼠的MDA含量低于模型組(P<0.05)。PUG-1可以劑量依賴性地提高衰老小鼠體內(nèi)抗氧化能力。
　　 4.采用預(yù)防性高血脂動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)方法考察波紋巴非蛤糖胺聚糖的降血脂活性,待測(cè)物PUG-1三個(gè)劑量組為100