血細(xì)胞分析儀質(zhì)控品的研制及其初步評(píng)價(jià).pdf

1、目的：1.采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法研究制備血細(xì)胞分析儀自制質(zhì)控品。2.探索人源血液作為血細(xì)胞分析儀自制質(zhì)控品原料時(shí)紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板的固定條件以及紅細(xì)胞的保養(yǎng)液配方。3.對(duì)血細(xì)胞分析儀自制質(zhì)控品的均勻性與穩(wěn)定性進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。
　　方法：1.從全血中分離出紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板。各類血細(xì)胞固定條件的探索采用L9(34)正交表，三因素為甲醛、戊二醛和固定時(shí)間，每個(gè)因素各自有三個(gè)處理水平。按照設(shè)計(jì)的固定條件固定結(jié)束，去除固定液，加入緩沖

2、液。將配置好的細(xì)胞懸液置于4℃，隔天測(cè)定紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞比容(HCT)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW-SD)、白細(xì)胞(WBC)、血小板(PLT)、平均血小板體積(MPV)等指標(biāo)，連續(xù)測(cè)定14天，計(jì)算各個(gè)組連續(xù)測(cè)定的平均值、標(biāo)準(zhǔn)差和CV值，采用所計(jì)算出的CV值做正交設(shè)計(jì)的方差分析，實(shí)驗(yàn)平行進(jìn)行三次。2.采用最佳固定方案固定好紅細(xì)胞后，將固定的紅細(xì)胞按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)加入對(duì)應(yīng)的保養(yǎng)液。保養(yǎng)液的最佳

3、配方摸索采用L12(211)正交表，其中包含八個(gè)因素分別為葡萄糖、腺嘌呤、檸檬酸三鈉、甘露醇、巴比妥鈉、檸檬酸合并檸檬酸三鈉、磷酸二氫鈉、甘油，每個(gè)因素各自有兩個(gè)水平。將配制好的紅細(xì)胞懸液置于4℃，連續(xù)測(cè)定14天，計(jì)算各個(gè)組連續(xù)測(cè)定的平均值、標(biāo)準(zhǔn)差和CV值，采用所計(jì)算出的CV值做正交設(shè)計(jì)的方差分析，實(shí)驗(yàn)平行進(jìn)行三次。3.根據(jù)CNAS-GL03《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》和ISO指南35《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值——般原則和統(tǒng)計(jì)原理》，用單

4、因素方差分析的方法評(píng)價(jià)自制質(zhì)控物的均勻性，用一元線性回歸分析的方法評(píng)價(jià)自制質(zhì)控品的穩(wěn)定性。
　　結(jié)果：1.不同的固定條件處理組之間，RBC、HGB、PLT三項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果的變化沒(méi)有差異（P＞0.05）。HCT的最佳固定條件為4％甲醛，不同戊二醛濃度、不同固定時(shí)間的各組之間沒(méi)有差異(P＞0.05)。MCV、RDW-SD兩項(xiàng)指標(biāo)的最佳固定條件為4％甲醛加0.5％戊二醛（P＜0.05），不同固定時(shí)間的各組之間沒(méi)有差異(P＞0.05)。W

5、BC最佳固定條件為2.2％甲醛加0.5％戊二醛，固定時(shí)間為30min(P＜0.05)。MPV最佳固定條件為4％甲醛，不同戊二醛濃度、不同固定時(shí)間的各組之間沒(méi)有差異(P＞0.05）。2.在RBC、HGB、HCT這三項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果變化中，不同的保養(yǎng)液配方組之間沒(méi)有差異(P＞0.05)。在MCV這項(xiàng)指標(biāo)中保養(yǎng)液中對(duì)固定紅細(xì)胞起保護(hù)作用的有效成分為葡萄糖、檸檬酸合并檸檬酸三鈉（P＜0.05），巴比妥鈉起破壞作用(P＜0.05)。在RDW-SD

6、這項(xiàng)指標(biāo)中保養(yǎng)液中對(duì)固定紅細(xì)胞起保護(hù)作用的有效成分為葡萄糖、檸檬酸三鈉、檸檬酸合并檸檬酸三鈉(P＜0.05)，巴比妥鈉起破壞作用(P＜0.05)。3.質(zhì)控物均勻性結(jié)果顯示:在RBC、HGB、HCT、RDW-SD、WBC、PLT這六項(xiàng)指標(biāo)中，樣品內(nèi)和樣品間統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;在MCV、MPV這兩項(xiàng)指標(biāo)中存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。各項(xiàng)指標(biāo)的均勻性不確定度分別為RBC(0.125％)、HGB(0.446％)、HC

7、T(0.163％)、MCV(1.028％)、RDW-SD(1.122％)、WBC(0.018％)、PLT(0.391％)、MPV(0.068％)，各指標(biāo)均勻性不確定度均小于方法重復(fù)性測(cè)量的不確定度。4.質(zhì)控品開瓶穩(wěn)定性數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示，開瓶14天內(nèi)RBC、HGB、WBC三項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果偏差分布范圍為-0.008～0.004、-0.013～0.006、-0.023～0.041，一元線性回歸分析顯示測(cè)定結(jié)果與時(shí)間不存在線性趨勢(shì)（P＞0.0

8、5），這三項(xiàng)指標(biāo)在開瓶14天內(nèi)保持穩(wěn)定。HCT、PLT兩項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果偏差分布范圍為0～0.055、-0.012～0.104，一元線性回歸分析顯示測(cè)定結(jié)果與時(shí)間存在線性趨勢(shì)（P＜0.05)，尚不能認(rèn)為該兩指標(biāo)穩(wěn)定。長(zhǎng)期穩(wěn)定性結(jié)果顯示，RBC、HGB、WBC三項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果與時(shí)間不存在線性趨勢(shì)（P＞0.05），能至少保持穩(wěn)定59天。
　　結(jié)論：1.不同血細(xì)胞的最佳固定條件不同，應(yīng)該分開固定。2.甲醛與戊二醛固定可以維持紅白細(xì)胞與血小