解淀粉芽胞桿菌Bacillus amyloliquefaciens T27甘露聚糖酶的發(fā)酵及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、β-甘露聚糖酶(β-1,4-D-mannan mannohydrolase,E.C3.2.1.78)特異性地水解甘露聚糖類半纖維素,產(chǎn)生大量的甘露寡糖和少量的甘露糖。該酶廣泛的存在于植物,動(dòng)物,微生物中,應(yīng)用于食品工業(yè)、造紙工業(yè)、紡織工業(yè)和飼料工業(yè)中。由于工業(yè)生產(chǎn)要求所使用的酶具有較強(qiáng)的穩(wěn)定性、耐熱性,乃至耐酸堿等特性,人們將目光投向高壓、高溫和特殊pH等極端環(huán)境的微生物,以尋求新型酶資源。從海洋微生物中篩選特殊性質(zhì)的β-甘露聚糖酶的菌

2、株,是開(kāi)發(fā)甘露聚糖酶的一個(gè)新方向。
　　 本研究從海泥中篩選出一株高活性甘露聚糖酶產(chǎn)生菌,16sDNA序列分析表明。該序列與解淀粉芽胞桿菌的16srDNA序列同源性為100％,將該菌株命名為Bacillus amyloliquefaciens T27。對(duì)該菌株產(chǎn)酶條件進(jìn)行了優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)以魔芋粉為碳源,酵母粉為氮源,裝液量為50ml,搖速為250rpm,在37℃,培養(yǎng)24小時(shí)的條件下,顯示出最佳產(chǎn)酶活性,發(fā)酵液中粗酶活達(dá)到98U/m

3、l。為了進(jìn)一步研究該菌株甘露聚糖酶的酶學(xué)性質(zhì),根據(jù)芽胞桿菌甘露聚糖酶基因序列設(shè)計(jì)引物,擴(kuò)增獲得了Bacillus amyloliquefaciens T27的甘露聚糖酶基因。測(cè)序結(jié)果表明,該基因全長(zhǎng)1083bp,編碼360個(gè)氨基酸,將其命名為Man27T。同源分析結(jié)果顯示,該基因與芽胞桿菌的甘露聚糖酶同源性最高,屬糖苷水解酶家族26。
　　 將該酶基因Man27T插入大腸桿菌表達(dá)載體pGEX-6p-1上,轉(zhuǎn)化大腸桿菌E.coli