植物內(nèi)生菌Myrothecium roridum次生代謝產(chǎn)物研究.pdf

1、摘 要植物內(nèi)生菌廣泛存在于宿主植物體內(nèi)，與宿主植物互惠共生，協(xié)同進(jìn)化。其代謝途徑特殊，能夠產(chǎn)生豐富多樣的活性代謝產(chǎn)物，為解決某些藥用植物生長緩慢、資源緊缺等引起的藥源匱乏和生態(tài)破壞等問題提供了新思路。植物內(nèi)生菌次生代謝產(chǎn)物成為發(fā)現(xiàn)新藥及新藥先導(dǎo)化合物的重要途徑之一。南京大學(xué)功能生物分子研究所從山麻黃莖中分離獲得肱r o r i d u m I F B ．L L Y ，從黃花蒿根部分離獲得M r o r i d u m I F B ．E

2、0 9 1 ，本學(xué)位論文對這兩株內(nèi)生真菌的固體發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行了研究。I F B ．L L y 和I F B ．E 0 9 1 固體發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)氯仿／甲醇( v ／v 1 ：1 ) 混合溶劑浸提數(shù)次，減壓去除溶劑，分別得粗浸膏5 2g 和3 8 g 。以1 H - N M R 譜和T L C 示蹤，采用硅膠柱層析、S e p h a d e xL H ．2 0 凝膠柱層析和高效液相色譜等方法對上述固體發(fā)酵產(chǎn)物粗浸膏中的化學(xué)成分進(jìn)行分離純化，結(jié)

3、果從Mr o r i d u m I F B ．L L Y 固體發(fā)酵產(chǎn)物中分離獲得1 1 個(gè)化合物( 1 ～1 1 ) ，從Mr o r i d u m I F B ．E 0 9 1 固體發(fā)酵產(chǎn)物中分離獲得3 個(gè)化合物( 1 2 ～1 4 ) ( 本課題組前期已從I F B ．E 0 9 1 中分離獲得1 個(gè)新單端孢霉烯大環(huán)內(nèi)酯r o r i t o x i nE 、2 個(gè)已知甾體化合物和1 個(gè)已知生物堿) 。采用高分辨質(zhì)譜( H R

4、．E S l - l 訌S ) 、1 D 和2 D 核磁共振譜( N M R ) 、紫外光譜( U V ) 、圓二色譜( C D ) 等現(xiàn)代波譜技術(shù)對獲得的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，上述化合物分別被鑒定為： 1 ．甲氧基吩嗪( 1 ．m e t h o x y p h e n a z i n e ，1 ) 、吩嗪．1 ．羧酸( 1 - p h e n a z i n e e a r b o x y l i c a c i d ，2 ) 、N

5、- m e t h y l - 1 H - i n d o l e - 2 - c a r b o x a m a i d e ( 3 ) 、尿嘧啶( u r a c i l ，4 ) 、胸腺嘧啶( t h y m i n e ，9 ) 、甲基硫赭曲菌素( m o n o m e t h y l s u l o c h r i n ，6 ) 、d i t r y p t o p h e n a l i n e( 7 ) 、胡蘿卜苷( d

6、 a u c o s t e r o l ，8 ) 、7 , 8 ．二甲基異咯嗪( 1 u m i c h r o m e ，9 ) 、1 ．3 , 9 ．三甲基尿酸( 1 , 3 ，9 - t r i m e t h y l u r i ca c i d ，1 0 ) 、( ．S ) - ( - ) - N - 【2 - 0 - H y d r o x y - 2 - O X O 一2 ，3 一d i h y d r o 一1 H -

7、 i n d o l 一3．y 1 ) 一e t h y l 】．a(chǎn) c e t a m i d e ( 1 2 ) 。其中，化合物1 2 未見文獻(xiàn)報(bào)道，為新化合物；化合物1 l 、1 3和1 4 結(jié)構(gòu)有待繼續(xù)鑒定。本研究還采用M T T 法對化合物l 、2 、3 、6 、7 和1 2 進(jìn)行抗腫瘤活性測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，化合物3 對人肝癌細(xì)胞S M M C ．7 7 2 1 具有一定的抗腫瘤活性，其I C s o 值為4 0 ．0l l g

8、 ／m l ( O ．2 3 0p M ) ，陽性對照順鉑的I C s o 值為1 1 ．5 p g ／m l ( 0 ．0 6 6B M ) 。植物內(nèi)生菌Mr o r i d u m 固體發(fā)酵能產(chǎn)生多種結(jié)構(gòu)類型化學(xué)成分，如：單端孢霉烯大環(huán)內(nèi)酯類、生物堿類、甾體類等，它們具有多種生物活性。植物內(nèi)生菌肱r o r i d u m 能夠?yàn)樗幚砘钚院Y選提供化合物來源，化學(xué)成分值得進(jìn)一步深入研究。關(guān)鍵詞：植物內(nèi)生菌；Mr o r i d u m

9、 ；次生代謝產(chǎn)物；分離純化：結(jié)構(gòu)鑒定：細(xì)胞毒活性目 錄中文摘要英文摘要縮略詞表第一章植物內(nèi)生菌抗腫瘤活性次生代謝產(chǎn)物研究進(jìn)展????????．·l1 ．1 植物內(nèi)生菌產(chǎn)生的抗腫瘤活性成分?????????????????????21 ．2 抗腫瘤活性成分篩選思路?????????????????????????1 01 ．2 ．1 靶向端粒酶???????????????????????????l O1 ．2 ．2 靶向微管和

10、微管蛋白???????????????????????1 01 ．2 ．3 基于腫瘤新生血管????????????????????????1 11 ．2 ．4 靶向細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路??????????????????????1 11 ．2 ．5 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡????????????????????????1 11 ．2 ．6 其它?????????????????????··：????????1 11 ．3 植

11、物內(nèi)生菌研究存在的問題和展望????????????????????1 2參考文獻(xiàn)????????????????????????????????1 2第二章植物內(nèi)生菌膨r o r i d u m 次生代謝產(chǎn)物研究?????????- ．1 72 ．1 儀器與試劑??????????????????????????????1 82 ．1 ．1 實(shí)驗(yàn)儀器????????????????????????????1 82 ．1 ．2 實(shí)驗(yàn)材料

12、與試劑?????????????????????????1 82 ．2 實(shí)驗(yàn)方法???????????????????????????????1 82 ．2 ．1 菌株來源及發(fā)酵方法???????????????????????1 82 ．2 ．2 發(fā)酵產(chǎn)物提取??????????????????????????1 92 ．2 ．3 發(fā)酵產(chǎn)物分離與純化分離與純化??????????????????1 92 ．2 ．4 化合物結(jié)構(gòu)鑒定??

13、???????????????????????2 12 ．2 ．5 M T T 法測定化合物的體外細(xì)胞毒活性????????????????2 12 ．3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果???????????????????????????????2 22 ．3 ．1 化合物結(jié)構(gòu)解析?????????????????????????2 22 ．3 ．2 化合物結(jié)構(gòu)鑒定?????????????????????????3 32 ．3 ．3 化合物的體外細(xì)胞毒活