扇貝多肽調(diào)節(jié)iNOS-NO及HSP抑制UVB誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞凋亡.pdf

1、目的：建立iNOS轉(zhuǎn)染HaCaT細(xì)胞模型，利用UVB誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞凋亡模型，從誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、一氧化氮(NO)、熱休克蛋白(HSP)及環(huán)氧合酶-2（COX-2）的角度，研究扇貝多肽（Polypeptide from Chlamys farreri，PCF）抑制UVB引起的HaCaT細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。 方法：建立iNOS穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及瞬時轉(zhuǎn)染HaCaT細(xì)胞模型.復(fù)制20 mJ/cm UVB誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞凋亡

2、模型。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分為6組：對照組、UVB模型組、UVB+iNOS特異性抑制劑SMT組、UVB+5.69 mmol/L PCF組、UVB+2.84mmol/L PCF組、UVB+1.42 mmol/L PCF組。以Hoechst33258熒光染色法測定細(xì)胞凋亡率；以電子自旋共振法(ESR)檢測UVB照射后細(xì)胞內(nèi)NO生成的經(jīng)時變化及PCF對其的影響；RT-PCR檢測iNOSmRNA的表達(dá)；蛋白質(zhì)印跡法檢測iNOS、HSP27、HSP70、HS

3、P90及COX-2蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：20 mJ/cm2 UVB可以誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞iNOS的mRNA和蛋白表達(dá)增高(P<0.05)，進(jìn)而NO釋放明顯增多(P<0.01)，并且UVB的輻射損傷反饋性的上調(diào)HSP70、HSP90的表達(dá)(P<0.05)。將iNOS基因轉(zhuǎn)染HaCaT細(xì)胞后，NO釋放量大量增多(P<0.05)。1.42~5.69 mmol/L劑量范圍內(nèi)的PCF與1 mmol/L SMT能夠明顯抑制UVB引起的HaCa

4、T細(xì)胞凋亡（P<0.05）；1.42~5.69mmol/L劑量范圍內(nèi)的PCF可抑制20 mJ/cm2UVB誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞iNOS表達(dá)及NO釋放(P<0.05，P<0.01)，并且可以上調(diào)保護(hù)性蛋白HSP70、HSP90的表達(dá)(P<0.05)：在轉(zhuǎn)染后的iNOS高表達(dá)HaCaT細(xì)胞中，PCF可明顯抑制NO的釋放(P<0.01)。 結(jié)論：PCF可抑制20 mJ/cm2 UVB誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞凋亡，其作用機(jī)理與抑制UVB誘導(dǎo)