鹽酸克倫特羅ELISA檢測方法的建立及其納米抗體的篩選.pdf

1、隨著人們生活水平的不斷提高，食品安全問題越來越受到人們的關注。一定劑量的鹽酸克倫特羅喂養(yǎng)動物以后能夠明顯增加動物的瘦肉率，因此受到不良商家的追捧。人在食用了含有鹽酸克倫特羅的肉及肉制品后會出現不同程度的中毒情況，嚴重的可導致死亡。酶聯免疫吸附檢測技術(ELISA)在檢測鹽酸克倫特羅殘留方面具有可定量、靈敏度高、操作方便等優(yōu)點?？贵w制備是ELISA檢測方法建立中的關鍵。傳統(tǒng)的多克隆抗體制備雖然簡單，但抗體純度不夠高，特異性差，易發(fā)生交叉反

2、應。而單克隆抗體生產成本高、生產周期長、操作繁瑣、技術難度高，需要真核細胞進行表達。納米抗體是來源于駱駝科動物體內重鏈抗體的最小的完整功能性抗原結合片段，分子質量僅為15KDa，具有親和力高、穩(wěn)定性好、篩選周期短、易于耦合成多價抗體等優(yōu)點。
　　本實驗首先采用重氮法合成了OVA與CL偶聯比為1：28.7的完全抗原。通過rProteinA對兔抗鹽酸克倫特羅的多克隆抗體進行了純化，純化后的抗體效價為1:80000，濃度為0.667mg

3、/mL，用于鹽酸克倫特羅ELISA檢測方法的建立其特異性有所提高。采用合成的完全抗原和親和純化后的抗體建立CL的ELISA檢測方法，通過對合成抗原包被濃度、一抗工作濃度、封閉液工作濃度等條件的優(yōu)化，最終檢測靈敏度可以達到6.4ng/mL。
　　最后利用噬菌體展示技術，從天然的納米抗體噬菌體文庫中篩選鹽酸克倫特羅的納米抗體，經過三輪“吸附-洗脫-擴增”、ELISA陽性鑒定后，從96個單菌落中挑選出了3株陽性克隆。本課題最終有望為EL