復(fù)合微生物飼料添加劑的研究.pdf

1、濫用抗生素嚴(yán)重地影響著畜產(chǎn)品的安全和質(zhì)量，尋找一種抗生素替代品成為當(dāng)前畜牧養(yǎng)殖急需解決的問(wèn)題。復(fù)合微生物飼料添加劑來(lái)源于腸道正常菌群，能夠通過(guò)優(yōu)勢(shì)菌群、生物拮抗等作用改善腸道微生物環(huán)境。調(diào)整并維持腸道微生物平衡，增強(qiáng)免疫能力，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，起到促生長(zhǎng)和防病的作用。因此，益生菌復(fù)合制劑已成為取代抗生素的首選開(kāi)發(fā)研究對(duì)象。
　　本研究采用耐酸和耐膽鹽試驗(yàn)、選擇性培養(yǎng)等方法，成功地從斷奶羔羊新鮮糞便中分離純化出一株具有良好耐受

2、模擬胃酸和模擬膽鹽環(huán)境的菌株，經(jīng)鑒定為乳酸菌 R1。通過(guò)單因素試驗(yàn)、正交優(yōu)化試驗(yàn)、添加菌體促生長(zhǎng)因子試驗(yàn)等對(duì)乳酸菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的研究。同時(shí)對(duì)本實(shí)驗(yàn)室保藏的一株枯草芽孢桿菌與一株釀酒酵母進(jìn)行了培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的優(yōu)化。并對(duì)乳酸菌R1進(jìn)行了微膠囊包埋，采用真空恒溫干燥法將枯草芽孢桿菌發(fā)酵液制備干菌粉，采用自然風(fēng)干法將釀酒酵母固體發(fā)酵物干燥研磨制備干菌粉。最后將乳酸菌R1微膠囊、枯草芽孢桿菌干菌粉和釀酒酵母干菌粉復(fù)配。制備了復(fù)合微生

3、物飼料添加劑。利用此制劑在羔羊上進(jìn)行了動(dòng)物活體實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　?。?）乳酸菌R1在初始為培養(yǎng)條件為：pH6.0、溫度34℃、靜置培養(yǎng)12-14小時(shí)、接種量4％時(shí)生長(zhǎng)狀態(tài)最好。最適培養(yǎng)基為：蛋白胨0.5%，葡萄糖2%，牛肉膏1%，酵母膏0.5%，吐溫800.1%，碳酸鈣0.2%，乙酸鈉0.5%，檸檬酸二銨0.2%，硫酸鎂0.02%，硫酸錳0.005%；增菌因子配比為：番茄汁2%，土豆汁3%，胡蘿卜汁6%，維生素C0.2%

4、；活菌數(shù)可以達(dá)到7.41×109CFU/mL。乳酸菌R1微膠囊包覆率達(dá)到了90.5%同時(shí)具有較好的耐酸性、較好的腸溶性，在常溫儲(chǔ)藏90d存活率為79.5%，活菌數(shù)為3.2×109CFU/g。
　?。?）枯草芽孢桿菌在初始培養(yǎng)條件為：pH為7.0-7.5、溫度35℃、裝液量30mL/250、接種量7%、轉(zhuǎn)速為200r/min、培養(yǎng)17h生長(zhǎng)狀態(tài)最好。最適培養(yǎng)基為葡萄糖3％、酵母膏1.5%、磷酸氫二鈉0.2％、磷酸二氫鈉0.1％；菌體

5、生物量達(dá)到7.90×109CFU/mL。木屑添加量為15g/25mL，芽孢產(chǎn)率接近95%，制備的干菌粉活菌數(shù)為5.71×1010CFU/g.
　?。?）釀酒酵母在培養(yǎng)條件為：搖床轉(zhuǎn)速150r/min、溫度25℃，接種量1%、裝液量25mL/250mL、培養(yǎng)20h生長(zhǎng)狀態(tài)最好。最佳液體培養(yǎng)基為紅糖5%、酵母膏2%、硫酸銨0.1%、氯化鉀0.2%；酵母活菌數(shù)達(dá)到了2.38×108CFU/mL固體培養(yǎng)基按麩皮∶糖蜜∶豆粕＝7∶2∶1的比

6、例配制，料水比1:0.6，用礦物質(zhì)鹽溶液拌料，培養(yǎng)時(shí)間60h，生物量最大值為8.73×109CFU/g，比優(yōu)化前提高了231.8倍。
　?。?）動(dòng)物活體試驗(yàn)表明：復(fù)合微生物飼料添加劑的使用，顯著地提高了羔羊的日增重，降低肉料比，降低了斷奶羔羊腹瀉發(fā)生率，其中對(duì)照組腹瀉發(fā)生率為26.7%，試驗(yàn)組腹瀉發(fā)生率僅為6%，羔羊腹瀉率降低了20.7%。本研究篩選得到較優(yōu)良的微生物飼料添加劑菌株，對(duì)其進(jìn)行發(fā)酵優(yōu)化，制劑增重防病效果顯著，為實(shí)際生