酪氨酸酶生物傳感器的研制及其應(yīng)用于有機(jī)磷類農(nóng)藥的檢測(cè).pdf

1、有機(jī)磷農(nóng)藥是目前使用非常廣泛的一類農(nóng)藥，它可以與體內(nèi)的乙酰膽堿酯酶(AChE)結(jié)合形成磷?；阴Ｄ憠A酯酶，使酶失去活性，從而使得神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿大量積蓄，造成神經(jīng)功能嚴(yán)重?fù)p傷，甚至死亡。傳統(tǒng)的有機(jī)磷農(nóng)藥檢測(cè)方法主要有氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)與色質(zhì)聯(lián)用法等，盡管這些方法靈敏、準(zhǔn)確，但是需要對(duì)樣品進(jìn)行繁瑣的預(yù)處理，費(fèi)時(shí)、成本高，而且儀器需要專業(yè)技術(shù)人員的操作和維護(hù)，不適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。因此，建立可靠、靈敏、快速和實(shí)用的有

2、機(jī)磷農(nóng)藥監(jiān)檢測(cè)的分析器件和方法，對(duì)于環(huán)境保護(hù)和食品安全等具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
　　 生物傳感器是將分子識(shí)別物質(zhì)如酶、DNA、抗體、細(xì)胞等作為分子識(shí)別物質(zhì)固定在傳導(dǎo)器上，將化學(xué)變化、熱變化等轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)的分析器件。由于它響應(yīng)快、靈敏度高、樣品需要量少、操作簡(jiǎn)便、價(jià)格低廉、可微型化、可以實(shí)現(xiàn)連續(xù)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)等特點(diǎn)，已成為分析檢測(cè)的重要器件。近年來(lái)，基于乙酰膽堿酯酶、有機(jī)磷水解酶和酪氨酸酶的有機(jī)磷電化學(xué)生物傳感的研究越來(lái)越受到人們的重視。

3、
　　 本論文共包括三章。第一章綜述了農(nóng)藥及其殘留問(wèn)題、有機(jī)磷農(nóng)藥檢測(cè)方法和導(dǎo)電聚合物、非導(dǎo)電聚合物。
　　 第二章研究了28種有機(jī)磷農(nóng)藥與酪氨酸酶之間的抑制關(guān)系。它們對(duì)酪氨酸酶抑制的差異比較大，有些甚至沒(méi)有明顯抑制作用。對(duì)酪氨酸酶抑制作用比較強(qiáng)的有機(jī)磷農(nóng)藥分別為二嗪磷、滅菌磷、碘硫磷、甲基氯吡硫磷，它們IC50值分別為0.0614、0.0278、0.072、0.08mmol/L。二嗪磷、甲基氯吡硫磷、甲基吡惡磷、滅菌磷

4、、碘硫磷均屬于混合型抑制劑，它既能與底物競(jìng)爭(zhēng)酶的活性中心，又通過(guò)生成酶-底物-抑制劑的三元絡(luò)合物來(lái)阻礙正反應(yīng)的進(jìn)行。特丁硫磷為競(jìng)爭(zhēng)型抑制劑，即抑制劑和底物競(jìng)爭(zhēng)酶的活性中心。同時(shí)，滅菌磷和甲基氯吡硫磷對(duì)酪氨酸酶的抑制作用均屬于可逆的過(guò)程，也就是說(shuō)增加效應(yīng)物的濃度將導(dǎo)致酶活力下降是由于酶活力受到抑制，催化效率降低，而不是通過(guò)減少有效酶量，而引起活力下降。
　　 第三章制備了鄰苯二胺、間苯二胺、1，8-萘二胺的非導(dǎo)電聚合物膜將酪氨酸酶

5、(Tyr)和底物(H2NQS)一起固定在玻碳電極上得到了GC-NQS-Tyr-oPPD、GC-NQS-Tyr-1，3-DAB、GC-NQS-Tyr-1，8-DAN三種生物傳感器。它們大多數(shù)都能很好的應(yīng)用于有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè)，且檢測(cè)限都在10-7～10-6范圍內(nèi)。但抑制效果各不相同，從第三章的分析知道間苯二胺非導(dǎo)電聚合物膜的酶?jìng)鞲衅鳈z測(cè)4種有機(jī)磷農(nóng)藥的整體效果最好。
　　 由于大部分的有機(jī)磷農(nóng)藥與酪氨酸酶之間屬于可逆性的抑制作用，故