Physisporinus sp漆酶純化、性質(zhì)及對(duì)染料的脫色研究.pdf

1、漆酶是一類含銅的氧化還原酶，它能催化酚類化合物，將酚類化合物進(jìn)行單電子氧化，形成酚自由基，進(jìn)而產(chǎn)生非酶催化的自由基反應(yīng)。由于漆酶特殊的催化性能和廣泛的底物范圍，在生物技術(shù)領(lǐng)域中得到廣泛的應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)以Physisporinus sp.為出發(fā)菌株，研究了在液體培養(yǎng)體系下，不同碳源、氮源和誘導(dǎo)物對(duì)其產(chǎn)漆酶的影響，對(duì)其胞外漆酶進(jìn)行了分離純化和酶學(xué)特性的研究，并將純化的漆酶應(yīng)用于偶氮類染料的脫色，主要結(jié)論如下：
　　本文研究了不同碳源、氮

2、源和誘導(dǎo)物對(duì)Physisporinus sp.胞外產(chǎn)漆酶的影響，研究發(fā)現(xiàn)最適碳源和最適氮源分別為葡萄糖和胰蛋白胨，藜蘆醇為該菌株胞外產(chǎn)漆酶的最佳誘導(dǎo)物。
　　通過(guò)鹽析、疏水層析和離子交換層析，可以將胞外漆酶進(jìn)行分離純化。通過(guò)80％飽和度的鹽析操作，漆酶比活為116.4U/mg，收率80.8％，純化倍數(shù)為1.5倍；疏水層析后收率為42.1％，純化倍數(shù)為10.1倍，漆酶比活為781.9U/mg；采用陰離子交換層析，最終的收率為20.4

3、％，純化19.6倍，漆酶比活為1515.1U/mg。SDS-PAGE結(jié)果顯示三步分離后的漆酶蛋白達(dá)到電泳純，其表觀分子量為62KDa。以ABTS為底物，該漆酶的最適pH值為3.0，最適反應(yīng)溫度為60℃。該漆酶在40℃條件下保持穩(wěn)定，50℃下保存1h剩余酶活為84％，60℃下保存1h剩余酶活為50％，表現(xiàn)出良好的溫度穩(wěn)定性。該漆酶在pH﹥6.0條件下比較穩(wěn)定。以ABTS和DMP為底物測(cè)定其動(dòng)力學(xué)常數(shù)，結(jié)果表明，與DMP相比，該漆酶對(duì)ABT

4、S顯示較好的親和力，其Km值和Vmax值分別為1.27×10-3和16.87μM/（L﹒min），而以DMP為底物，其Km值和Vmax值分別為2.82×10-3和5.24μM/（L﹒min）。多數(shù)的金屬離子對(duì)漆酶的活性略有提升，而Fe2+、Ni2+、Co2+和Hg2+能顯著抑制漆酶的酶活。有機(jī)溶劑能夠顯著抑制漆酶的酶活，其中5％的甲醇抑制效果最弱。
　　純化后的漆酶應(yīng)用于偶氮類染料SY,，DR5B，CB38和DB22的脫色，實(shí)驗(yàn)顯

5、示在沒(méi)有介體存在下，該漆酶對(duì)四種偶氮染料顯示出較低的脫色能力，3小時(shí)后四種染料的脫色率分別為13％，2％，7％和12％。然而在丁香醛作為介體的條件下，該漆酶對(duì)四種偶氮類染料顯示出較好的脫色能力。在丁香醛濃度為0.5mM時(shí)，10min該漆酶對(duì)SY的脫色率為98％；0.1mM的丁香醛存在下，10min該漆酶對(duì)DR5B的脫色率則可以達(dá)到97％；丁香醛濃度為0.1mM時(shí)，10min該漆酶對(duì)CB38和DB22的脫色率分別為53％和48％。然而隨著