魚膽草中獐牙菜苦苷的提取純化及中試工藝研究.pdf

1、魚膽草(Swertia davidii),官方稱川東獐牙菜,是常用一個(gè)民族土家族民間醫(yī)藥,它主要含有環(huán)烯醚萜類成分皂苷類及黃酮類成分,是獐牙菜屬食品藥品的的主要功效植物,其中獐牙菜苦苷含量占原藥材的3％左右。
　　獐牙菜苦苷(swertiamarine)為裂環(huán)環(huán)烯醚萜成分,是龍膽科植物主要成分之一。它有防止肝損傷，抗氧化、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、消除水腫、抗炎及清除自由基的作用[2]。但是目前從魚膽草中制備高純度獐牙菜苦苷的文獻(xiàn)報(bào)道較少，馮波

2、等從龍膽中分離獐牙菜苦苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.44%[3],周大成等利用 HPD-100大孔吸附樹脂分離獐牙菜苦苷含量為52.29%[4]本文將通過提取、大孔樹脂層析、活性炭柱層析，研究出一條高純度獐牙菜苦苷(質(zhì)量分?jǐn)?shù)>90%)的工藝并通過中試研究，同時(shí)對分離的獐牙菜苦苷活性進(jìn)行測定，具體內(nèi)容如下:
　　（1）提取工藝條件的優(yōu)化
　　以獐牙菜苦苷的提取率為指標(biāo)，通過對提取時(shí)間、提取溶劑、提取溫度、提取料液比等條件進(jìn)行單因素和正交試驗(yàn)

3、確定魚膽草中獐牙菜苦苷最佳提取工藝參數(shù)為：料液比1︰10，溫度60℃，乙醇濃度10%，提取時(shí)間為10 min，其提取率達(dá)到88%。
　　（2）分離純化工藝的研究
　　分離工藝：通過對六種不同類型大孔樹脂的篩選，經(jīng)過靜態(tài)吸附解吸附試驗(yàn)確定選用AB-8大孔樹脂作為獐牙菜苦苷的分離樹脂，其飽和吸附量為19.43mg/g，其柱層析參數(shù)為：動(dòng)態(tài)吸附量為40.5mg/g、徑高比為1∶8、洗脫溶劑為20%乙醇、洗脫量為3.5BV。柱層析分

4、離得獐牙菜苦苷粗提物，含量為60%，柱層析過程獐牙菜苦苷的回收率為80%。
　　純化工藝：采用無水乙醇醇沉精制得獐牙菜苦苷精制物，將精制物水溶上活性炭和硅藻土混合柱靜置2h，以2BV純水除雜，近15 BV甲醇洗脫，回收甲醇得到樣品，再采用無水乙醇溶解靜置結(jié)晶，獐牙菜苦苷晶體純度>90%。
　　（3）中試工藝調(diào)試
　　在中試車間進(jìn)行三批次中試調(diào)試，每批投料量為50公斤藥材，以10、8倍量30%乙醇分別提取2次,提取時(shí)間均

5、為2h，合并2次提取液回收溶劑至無醇味，常溫放置冷沉后過濾，提取率為86%；濾液通過AB-8大孔樹脂柱、活性炭柱分離純化，回收溶劑后得到獐牙菜苦苷提取物，其含量在88%以上，獐牙菜苦苷總回收率58%左右。通過中試調(diào)試驗(yàn)證，確定此工藝重復(fù)性好，穩(wěn)定可行，且中試三批次產(chǎn)品生產(chǎn)成本平均為8587元/kg，與同期市場價(jià)格比較具有競爭力。
　?。?）活性測試
　　將中試工藝中制得的58%、88%的獐牙菜苦苷樣品進(jìn)行巨噬細(xì)胞活化抑制活性

6、探究，通過酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA法)檢測巨噬細(xì)胞腫瘤壞死因子(TNF-α)的含量來判定其活化作用。結(jié)果TNF-α含量由少到多依次為：獐牙菜苦苷（88%）+LPS組　　綜上所述本文完成了獐牙菜苦苷提取條件、大孔樹脂以及活性炭填料的篩選，探索出了一條用廉價(jià)填料層析純化高純度獐牙菜苦苷的