從鴨蛋黃蛋白提取卵黃高磷蛋白與制備肽螯合鈣工藝研究.pdf

1、本文以提取蛋黃卵磷脂和蛋黃油后的鴨蛋黃蛋白為原料，研究鹽水浸提法對卵黃高磷蛋白提取效果的影響，確定氯化鈉溶液提取卵黃高磷蛋白的工藝參數(shù);研究過氧乙酸對鴨蛋黃蛋白的處理效果，確定適宜的過氧乙酸預(yù)處理工藝;在過氧乙酸預(yù)處理的基礎(chǔ)上，研究六種商品化蛋白酶:胰蛋白酶、中性蛋白酶、風(fēng)味酶、堿性蛋白酶、動物蛋白水解酶、木瓜蛋白酶對鴨蛋黃蛋白的酶解效果，篩選出適合鴨蛋黃蛋白水解的較佳用酶，采用多酶分步水解法，考察不同的酶組合對鴨蛋黃蛋白的水解效果，確

2、定適宜的多酶水解工藝條件;以鴨蛋黃蛋白酶解多肽液和無水氯化鈣為原料，研究濕法螯合條件對鈣螯合率的影響，確定鴨蛋黃蛋白酶解多肽液與無水氯化鈣的最適螯合條件，并利用無水乙醇沉淀制備鴨蛋黃蛋白肽螯合鈣。主要研究結(jié)果如下:
　　1.以鴨蛋黃蛋白為原料，采用氯化鈉溶液提取卵黃高磷蛋白，設(shè)計四因素三水平的響應(yīng)面優(yōu)化試驗，確定了卵黃高磷蛋白的最佳提取工藝為:氯化鈉濃度12％，提取時間5h/次，洗滌次數(shù)5次，液料比12∶1;在此條件下，卵黃高磷蛋

3、白得率的理論極值為5.47％。卵黃高磷蛋白的得率為5.27％，提取率為88.16％。
　　2.以鴨蛋黃蛋白為原料，過氧乙酸對鴨蛋黃蛋白進行了預(yù)處理。采用多指標(biāo)綜合評分法，確定了過氧乙酸預(yù)處理的最佳工藝條件:過氧乙酸濃度0.2％，處理時間40min，底物濃度5％，處理溫度50℃。
　　3.研究了鴨蛋黃蛋白水解的蛋白酶篩選與復(fù)配。以水解度為指標(biāo)，篩選出了適合于酶法制備鴨蛋黃蛋白多肽的蛋白酶:中性蛋白酶、堿性蛋白酶和風(fēng)味酶。

4、>　　試驗以水解度為指標(biāo)，通過單因素和正交試驗設(shè)計，優(yōu)化出了單酶水解工藝:中性蛋白酶:底物濃度為5％，酶添加量為0.8％，水解時間為7h，pH值為7.0，水解溫度為50℃，在此條件下，水解度可達54.38％;堿性蛋白酶:底物濃度為5％，酶添加量為1.2％，水解時間為12h，pH值為9.5，水解溫度為55℃，在此條件下對鴨蛋黃蛋白進行水解，水解度可達58.18％;風(fēng)味酶:底物濃度5％，酶添加量2.1％，水解時間12h，pH值為7.0，水解

5、溫度為50℃，在此條件下，水解度可達33.41％。
　　以水解度和水解液氮得率為指標(biāo)，研究了中性蛋白酶+風(fēng)味酶，堿性蛋白酶+風(fēng)味酶，中性蛋白酶+堿性蛋白酶，堿性蛋白酶+中性蛋白酶，中性蛋白酶+堿性蛋白酶+風(fēng)味酶，堿性蛋白酶+中性蛋白酶+風(fēng)味酶6種蛋白酶組合對鴨蛋黃蛋白的酶解效果，篩選出了中性蛋白酶+堿性蛋白酶+風(fēng)味酶作為最佳蛋白酶組合，即水解工藝為:底物濃度為5％，中性蛋白酶在酶添加量為0.8％，pH值為7.0，水解溫度為50℃條

6、件下，水解7h，然后調(diào)節(jié)pH9.5，在堿性蛋白酶:酶添加量為1.2％， pH值為9.5，水解溫度為55℃條件下，水解12h，最后調(diào)節(jié)pH7.0，在風(fēng)味酶:酶添加量2.1％， pH值為7.0，水解溫度為50℃條件下，水解12h。在此條件下，水解度可達85.84％，水解液氮得率可達91.62％。通過對其水解產(chǎn)物肽分子量的分布的研究，發(fā)現(xiàn)水解產(chǎn)物中至少有8種不同分子量的肽類物質(zhì)，相對分子質(zhì)量均在10000Da以下，分子量低于3196Da的短肽