青海部分牧區(qū)牦牛乳制品中產(chǎn)胞外多糖乳酸菌的分離鑒定及特性研究.pdf

1、目的：從青海牧區(qū)牧民家庭自制牦牛乳制品（酸奶、曲拉）中分離產(chǎn)EPS乳酸菌，構(gòu)建青海地區(qū)乳酸菌種群系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，鑒定高產(chǎn)EPS乳酸菌，并研究高產(chǎn)EPS乳酸菌的益生特性，為后期產(chǎn)EPS乳酸菌在乳品工業(yè)中的開(kāi)發(fā)及利用提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：乳酸菌分離采用MRS平板法，結(jié)合形態(tài)、生化實(shí)驗(yàn)初篩，16s rDNA序列測(cè)定、NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)BLAST比對(duì)，BioEdit軟件Fast化序列，根據(jù)鄰接法（Neighbor-Joining）建立進(jìn)化樹(shù)來(lái)

2、確定乳酸菌種屬；多糖產(chǎn)量定量分析采用苯酚–硫酸法；抑菌實(shí)驗(yàn)采用瓊脂擴(kuò)散法(Papamaloniet al.,2003)。模擬胃腸道存活實(shí)驗(yàn)采用酸堿度結(jié)合特定酶體外模擬實(shí)驗(yàn)完成；體內(nèi)益生特性研究采用灌胃法造模、細(xì)胞因子測(cè)定采用ELISA法。
　　結(jié)果：從57份樣品中分離到純菌種86株，生化試驗(yàn)結(jié)合16s rDNA分析確定乳酸菌菌株52株，歸屬于5個(gè)菌屬，分別是嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus）33株、

3、糞腸球菌(Enterococcus faecalis）6株、側(cè)孢短芽孢桿菌(Brevibacillus laterosporus）4株、干酪乳桿菌（Lactobacillus casei）5株、嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilu）4株；發(fā)酵上清液EPS濃度為(16.09±5.39)mg/L，產(chǎn)量最高的是嗜熱鏈球菌，來(lái)自果洛州；抑菌試驗(yàn)52株乳酸菌菌株對(duì)四種致病菌均有抑制作用，所有菌株抑制病原菌生長(zhǎng)能力較弱；模擬

4、胃腸道生存實(shí)驗(yàn)中，不同時(shí)間存活率存在差異，?2=247.87， P<0.01，存活率中位數(shù)（四分位數(shù)間距，％）為：模擬胃液3 h為92.70（91.75，93.54），腸液3 h為88.54（87.99，89.18），腸液6 h中位數(shù)為84.36（83.21，86.28），腸液12 h中位數(shù)為76.02（74.42，77.21），腸液24 h中位數(shù)為65.43（64.32，66.94），存活率隨時(shí)間的增長(zhǎng)而降低。臟器指數(shù)：抗氧化特性研究

5、中，心、肝、腎三個(gè)臟器指數(shù)無(wú)差異（P>0.05），脾臟指數(shù)存在差異（P<0.01），兩兩比較發(fā)現(xiàn)衰老組脾臟指數(shù)與其余各組存在差異，且高于其他各組，而除衰老組以外的其他四組脾臟指數(shù)無(wú)差異；免疫特性研究中，EPS處理組與正常組實(shí)驗(yàn)后體重存在差異（t=10.19，P<0.01），給予EPS灌胃處理組小鼠的體重大于自然生長(zhǎng)的正常組，兩組在臟器（心、肝、腎、脾、胸腺）指數(shù)上均無(wú)差異。MDA因子組間存在差異（F=50.97，P<0.01），兩兩比較

6、發(fā)現(xiàn)正常組與各處理組均存在差異，衰老組跟其他各組存在差異，EPS低劑量組與其他各組均存在差異，EPS高劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組無(wú)差異。CAT因子各組存在差異（F=73.42，P<0.01），所有處理組與正常組比較均存在差異，EPS低劑量組與衰老組、EPS高劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組無(wú)差異，EPS低劑量組與EPS高劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組存在差異。SOD因子各分組間均存在差異。EPS處理組與正常組血清免疫因子（IL-10、1L-12、IFN-γ）均存在著差異

7、，EPS灌胃處理組免疫因子表達(dá)量均高于正常組。
　　結(jié)論：青海57份傳統(tǒng)牦牛發(fā)酵乳的優(yōu)勢(shì)乳酸菌是嗜熱鏈球菌，次級(jí)優(yōu)勢(shì)菌是糞腸球菌；青海牧區(qū)傳統(tǒng)牦牛發(fā)酵乳中乳酸菌產(chǎn)EPS產(chǎn)量相對(duì)較低；乳酸菌對(duì)四種腸道病原菌的抑制作用較弱，以對(duì)大腸桿菌抑制作用最強(qiáng)；抵抗胃酸生長(zhǎng)能力較弱；模擬胃腸道生長(zhǎng)不同環(huán)境存活率存在差異；不同菌株間存活率不完全相同；G10-3-3菌株所產(chǎn)EPS沒(méi)有毒副作用；G10-3-3菌株所產(chǎn)EPS可以上調(diào)SOD、CAT產(chǎn)量，下