DNA-RNA同步提取方法學的建立及其法醫(yī)學應用研究.pdf

1、目的:
　　 為了更好的確定微量生物檢材的個體來源和組織來源，本課題旨在建立一種用Trizol試劑對法庭科學中同一生物檢材同步提取DNA/RNA的新方法;用建立的方法對五種法醫(yī)相關體液DNA進行檢測，以進一步驗證所建立方法的有效性;并探索建立這五種體液的特異性mRNA復合擴增體系。
　　 方法:
　　 制備同一個體的外周血FTA卡樣本20份，每份含10μL外周血。分為兩組:普通Trizol法組，按照Trizol試

2、劑說明書對樣本DNA進行提取;改良Trizol法組，通過改變普通Trizol法收集水相總RNA后余下的中間層和有機相的pH，用乙醇沉淀當中的DNA，然后用Promega DNA IQTM試劑盒純化。檢測兩種方法提取DNA的純度和濃度，并以之為模板進行終點PCR和STR檢測，比較兩種方法提取DNA的純度、濃度及STR分型;兩種方法總RNA的提取均按照試劑說明書進行，使用本課題組成員前期所建立的方法檢測RNA的提取效果;利用所建立的改良Tr

3、izol法對外周血、唾液、精液、陰道分泌物、月經(jīng)血DNA/RNA進行提取，檢測提取DNA的STR分型;選取擴增條件相同的9對引物，包括7對以上五種體液的特異性mRNA引物和2對管家基因的引物，并根據(jù)片段大小對引物標記不同熒光，初步建立同一生物檢材的mRNA復合RT-PCR體系，用毛細管凝膠電泳法對mRNA逆轉(zhuǎn)錄擴增產(chǎn)物進行檢驗。
　　 結(jié)果:
　　 1改良Trizol法可以對同一檢材的DNA/RNA進行同步提取。

4、　　 2改良Trizol法提取的10μL外周血DNA純度為1.470±0.065，濃度為1.498+0.297ng/μL。普通Trizol法提取的基因組DNA純度為1.301+0.065，濃度為0.618±0.209 ng/μL。擴增STR分型均良好。RNA提取效果良好。
　　 3改良Trizol法提取外周血、唾液、精液、陰道分泌物、月經(jīng)血DNA均可獲得良好的STR分型。
　　 4利用9對引物建立的五種復合擴增體系所得