5個(gè)miniSTR基因座位點(diǎn)復(fù)合擴(kuò)增體系的檢驗(yàn)和鑒定.pdf

1、研究背景及目的：
　　短串聯(lián)重復(fù)序列(Short Tandem Repeat，STR)，也叫微衛(wèi)星DNA或簡(jiǎn)單重復(fù)序列，廣泛存在于真核生物基因組中。其核心序列為2-6 bp，具有分布廣泛、片段短、易于檢測(cè)、遺傳信息含量大、遺傳多態(tài)性高等特征。STR分型技術(shù)作為第二代遺傳標(biāo)記的主要代表，已經(jīng)廣泛運(yùn)用于法醫(yī)物證領(lǐng)域，是親權(quán)鑒定、個(gè)體識(shí)別最常用、最有效的手段。尤其profilerPlus、Identifiler、powerPlex16等

2、商品化STR復(fù)合擴(kuò)增試劑盒及多重?zé)晒鈾z測(cè)技術(shù)的廣泛應(yīng)用，使得STR分型技術(shù)應(yīng)用達(dá)到了一個(gè)全新的高度。目前商品化的常規(guī)STR復(fù)合擴(kuò)增試劑盒STR基因座位點(diǎn)主要包括CODIS(combined DNA index system)系統(tǒng)的13個(gè)核心基因座位點(diǎn)及D2S1338、D19S433、PentaD，PentaE等常染色體STR基因座位點(diǎn)。其中大部分的基因座位點(diǎn)擴(kuò)增產(chǎn)物片段的長(zhǎng)度都超過(guò)200bp甚至達(dá)到500bp。在復(fù)雜多變的自然環(huán)境中，尤

3、其是潮濕、高溫、紫外線、暴曬、微生物、強(qiáng)酸等環(huán)境因素會(huì)使生物檢材中的DNA損傷，雙鏈斷裂，DNA分子長(zhǎng)度變短。對(duì)這種降解的生物檢材進(jìn)行常規(guī)STR分型檢驗(yàn)，就容易出現(xiàn)大片段STR基因座位點(diǎn)等位基因缺失，導(dǎo)致分型失敗。極大的限制了STR分型技術(shù)在微量、降解生物檢材中的運(yùn)用，從而導(dǎo)致一些重要的生物檢材在案件的偵破中的價(jià)值未能得到充分的體現(xiàn)，不利于案件的快速偵破。為了彌補(bǔ)常規(guī)STR檢測(cè)技術(shù)的運(yùn)用缺陷，Bulter等在原來(lái)的STR分型技術(shù)基礎(chǔ)上，

4、通過(guò)重新設(shè)計(jì)引物，使正反向引物盡可能移向核心重復(fù)序列，減小擴(kuò)增產(chǎn)物片段的長(zhǎng)度，同時(shí)保持原STR基因座位點(diǎn)的遺傳多態(tài)性和原有的分型結(jié)果不變，2003年該項(xiàng)技術(shù)被正式命名為mini STR分型技術(shù)。此后，各國(guó)學(xué)者陸續(xù)開始從事mini STR的相關(guān)研究。2006年，美國(guó)AB公司研制開發(fā)出第一個(gè)minifiler商品試劑盒，但是該試劑盒只包括8個(gè)mini STR基因座位點(diǎn)，由于基因座位點(diǎn)偏少，在個(gè)體識(shí)別等運(yùn)用中存在個(gè)體識(shí)別率不足的缺點(diǎn)。為此，本

5、實(shí)驗(yàn)通過(guò)篩選不同染色體上的5個(gè)mini STR基因座位點(diǎn)，建立新的復(fù)合擴(kuò)增體系及試劑盒，作為minifiler等商品試劑盒的有效補(bǔ)充，通過(guò)與其聯(lián)合運(yùn)用，提高微量、降解生物檢材的STR基因座位點(diǎn)分型成功率從而達(dá)到個(gè)體識(shí)別的目的。
　　方法：
　　在前期通過(guò)篩選并建立5個(gè)mini STR基因座位點(diǎn)復(fù)合擴(kuò)增體系及重慶地區(qū)人群等位基因標(biāo)準(zhǔn)物的基礎(chǔ)上，參照美國(guó)DNA分析方法技術(shù)工作組(TWGDAM)的指導(dǎo)方案，對(duì)本實(shí)驗(yàn)多重?zé)晒鈴?fù)合擴(kuò)增

6、系統(tǒng)進(jìn)行靈敏度、準(zhǔn)確度、遺傳穩(wěn)定性、種屬特異性、組織特異性檢驗(yàn)，對(duì)不同提取方法對(duì)分型結(jié)果的影響、以及在人工組織降解模型、腐敗組織中的運(yùn)用等進(jìn)行研究。旨在評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)多重?zé)晒鈴?fù)合擴(kuò)增體系在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用價(jià)值。
　　結(jié)果：
　　該復(fù)合擴(kuò)增體系的靈敏度檢測(cè)域?yàn)?5pg模板DNA；該復(fù)合擴(kuò)增體系具有較高的種屬特異性和組織同一性；通過(guò)對(duì)24例實(shí)際檢案的對(duì)比研究和分析，該體系能夠有效用于個(gè)體識(shí)別和親權(quán)鑒定等實(shí)際檢案；通過(guò)對(duì)該體系的5個(gè)

7、mini STR基因座位點(diǎn)的聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)果與復(fù)合擴(kuò)增分型結(jié)果對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)本復(fù)合擴(kuò)增體系分型結(jié)果是準(zhǔn)確的；通過(guò)不同DNA提取方法對(duì)同-DNA樣本的擴(kuò)增分型結(jié)果對(duì)比研究發(fā)現(xiàn)，采用不同的方法提取DNA，對(duì)本體系5個(gè)mini STR基因座位點(diǎn)的分型結(jié)果無(wú)影響；通過(guò)對(duì)人工組織降解模型和腐敗組織的研究發(fā)現(xiàn)，該體系對(duì)降解檢材具有較好的擴(kuò)增效果，可用于常規(guī)STR商品試劑盒復(fù)合擴(kuò)增失敗的降解檢材的分型，
　　結(jié)論：
　　本次實(shí)驗(yàn)建立的

8、5個(gè)熒光標(biāo)記mini STR基因座位點(diǎn)復(fù)合擴(kuò)增體系分型結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好，靈敏度高，不同DNA提取方法對(duì)miniSTR基因座位點(diǎn)的分型結(jié)果無(wú)影響，種屬特異性及組織同一性良好，對(duì)于分析微量、降解生物檢材DNA的分型成功率較常規(guī)STR商品試劑盒明顯提高，可用于法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域親權(quán)鑒定及個(gè)人識(shí)別，尤其對(duì)微量、降解生物檢材的DNA分型具有較高的應(yīng)用價(jià)值，為開發(fā)國(guó)產(chǎn)的miniSTR基因座位點(diǎn)分型試劑盒打下了良好的基礎(chǔ)，有力的推動(dòng)我國(guó)miniSTR商品試