骨折愈合過(guò)程中歸巢現(xiàn)象及相關(guān)因子的表達(dá).pdf

1、目的：應(yīng)用干細(xì)胞、細(xì)胞因子等技術(shù)修復(fù)骨折后損傷是近年來(lái)骨科領(lǐng)域的研究熱點(diǎn).為了使骨折愈合,首先要有足夠數(shù)量的干細(xì)胞到達(dá)骨折區(qū)域,并在這一區(qū)域停留足夠長(zhǎng)的時(shí)間。然而,目前各文獻(xiàn)中關(guān)于骨折后干細(xì)胞歸巢到骨折部位的報(bào)道很少,對(duì)于引起這一變化的機(jī)制更是所知甚少。本研究擬建立大鼠的右側(cè)股骨骨折動(dòng)物模型,分別檢測(cè)其骨折后不同時(shí)間點(diǎn)骨折部位相關(guān)蛋白因子表達(dá)變化情況,并與左側(cè)股骨對(duì)照進(jìn)行比較,以研究骨折愈合過(guò)程中干細(xì)胞歸巢到骨折部位的機(jī)制和相關(guān)因子的表

2、達(dá)。
　　 方法：第一部分采用貼壁培養(yǎng)法體外分離、培養(yǎng)大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞(Meseuchymal Stem Cells,MSCs),用流氏細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞表型。用PKH-26標(biāo)記MSCs。第二部分,24只大鼠隨機(jī)分為A、B和c三組,每組8只,建立右側(cè)股骨骨折模型,左側(cè)為對(duì)照.將標(biāo)記好的細(xì)胞注入大鼠股骨骨折模型中,觀察細(xì)胞的示蹤情況。移植后3、7和14天分別處死A、B和C三組大鼠,取出雙側(cè)股骨,左側(cè)為對(duì)照,用熒光成像系統(tǒng)檢測(cè)干細(xì)胞歸巢

3、情況。最后,取不同三組大鼠的雙側(cè)股骨組織,右側(cè)股骨為實(shí)驗(yàn)組,左側(cè)股骨為對(duì)照,經(jīng)固定,脫鈣制作病理切片,共聚焦顯微鏡聯(lián)合免疫組化技術(shù),觀察MSCs移植后在不同時(shí)點(diǎn)的分布和相關(guān)因子的表達(dá)。
　　 結(jié)果：大鼠MSCs為均一的梭形的成纖維細(xì)胞樣生長(zhǎng),貼壁及增殖能力強(qiáng)；流式細(xì)胞術(shù)鑒定為間充質(zhì)干細(xì)胞。A組骨折部位熒光標(biāo)記的MSCs細(xì)胞數(shù)明顯高于對(duì)照組。B和C組骨折端干細(xì)胞歸巢明顯多于健側(cè),也多于A組骨折端。B、C兩組骨折部位干細(xì)胞歸巢無(wú)明顯