應(yīng)用DF-1細(xì)胞和激流式生物反應(yīng)器大規(guī)模增殖IBDV的研究.pdf

1、雞傳染性法氏囊病是由雞傳染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的雞和火雞的一種急性高度接觸性傳染病。目前,該病主要通過(guò)疫苗接種來(lái)防控。除給雛雞使用活疫苗免疫外,通常還給種雞注射滅活疫苗使雛雞獲得高的母源抗體,以保護(hù)其在生命早期不感染傳染性法氏囊病病毒。國(guó)內(nèi)雞傳染性法氏囊病滅活疫苗的生產(chǎn)通常采用雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)病毒液后制備而成。因雞傳染性法氏囊病毒在雞胚成纖維細(xì)胞上增殖滴度不高,需

2、要加大濃縮倍數(shù),增加生產(chǎn)成本,免疫效果差,所以在實(shí)踐中應(yīng)用效果差。目前,國(guó)內(nèi)各大種雞場(chǎng)大多采用進(jìn)口滅活疫苗。為了研究雞傳染性法氏囊病毒高效培養(yǎng)方法,本研究采用雞胚源DF-1細(xì)胞系代替?zhèn)鹘y(tǒng)的雞胚成纖維細(xì)胞,用激流式生物反應(yīng)器紙片載體代替?zhèn)魍ǖ牟ＡмD(zhuǎn)瓶培養(yǎng)雞傳染性法氏囊病毒,為生產(chǎn)上提供一種優(yōu)質(zhì)、高效的法氏囊滅活疫苗,以滿(mǎn)足市場(chǎng)的需要。研究結(jié)果如下:
　　 1.通過(guò)對(duì)DF-1細(xì)胞傳代、復(fù)蘇及凍存方法、培養(yǎng)條件等特性進(jìn)行研究,確定了D

3、F-1細(xì)胞的最佳培養(yǎng)條件。DF-1細(xì)胞可在37℃條件下培養(yǎng),培養(yǎng)基為DMEM/F12,生長(zhǎng)期的培養(yǎng)基中加入10％的胎牛血清最好,細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)應(yīng)采用換液而不能采取離心的方法。
　　 2.通過(guò)在方瓶中對(duì)雞傳染性法氏囊病毒HQ株在DF-1細(xì)胞上的適應(yīng)及增殖條件進(jìn)行優(yōu)化,結(jié)果表明,雞傳染性法氏囊病毒HQ毒在DF-1細(xì)胞上具有很好的適應(yīng)性,而在Vero細(xì)胞上適應(yīng)性差。雞傳染性法氏囊病毒在DF-1細(xì)胞上增殖的最佳pH為7.0,最佳維持液血清含

4、量為2％,最佳接毒時(shí)間為細(xì)胞傳代后72h,最佳接毒量的MOI為0.8(TCID50/細(xì)胞),最佳收毒時(shí)間為接種后36h。這為IBDV在生物反應(yīng)器大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)的研究提供了參考依據(jù)。
　　 3.對(duì)應(yīng)用AP10和AP20激流式生物反應(yīng)器和紙片載體增殖IBDV的條件進(jìn)行優(yōu)化,試驗(yàn)結(jié)果表明,反應(yīng)器中IBDV增殖的最適pH為7.0-7.2,37℃最適合細(xì)胞與病毒的增殖,AP10激流式生物反應(yīng)器最佳的細(xì)胞接種數(shù)量為3×109個(gè),MOI為0.

5、9(TCID50/細(xì)胞),當(dāng)細(xì)胞的糖耗下降至接近零時(shí)為最佳收病毒時(shí)間,IBDV在反應(yīng)器中的毒價(jià)可達(dá)到109.5TCID50·mL-1。
　　 本研究在國(guó)內(nèi)首次采用DF-1細(xì)胞系代替雞胚或其原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)IBDV,并首次采用激流式生物反應(yīng)器和紙片載體代替轉(zhuǎn)瓶大量增殖DF-1細(xì)胞進(jìn)行IBDV的大規(guī)模培養(yǎng),使IBDV的毒價(jià)由在轉(zhuǎn)瓶成纖維細(xì)胞上培養(yǎng)時(shí)的107.5TCID50·mL-1上升至目前的109.5TCID50·mL-1,提高