兔MT1，MT2和MT3基因CDS區(qū)克隆及MT2基因原核表達.pdf

1、本試驗以健康無病的10只比利時兔為材料，分別從兔肌肉、大腦和肝組織中提取總RNA。根據(jù)GenBank中已發(fā)表的人、小鼠、牛、大鼠的MT1，MT2和MT3基因的CDS區(qū)序列設計引物，通過RT-PCR和克隆技術分別克隆出兔MT1，MT2和MT3基因的CDS全序列。MT1，MT2和MT3基因CDS區(qū)序列分別全長186bp、186bp和201bp，編碼61、61和66個氨基酸。MT1，MT2和MT3基因之間的核苷酸同源性為82.42％，氨基酸同

2、源性為78.28％。其中MT1和MT2基因核苷酸同源性為89.59％，氨基酸同源性為81.97％；MT2與MT3基因核苷酸同源性為76.27％，氨基酸同源性為63.64％；MT1與MT3基因核苷酸同源性為75％，氨基酸同源性為66.67％。通過核苷酸序列分析結(jié)果顯示兔MT1基因與狗、人、大鼠和小鼠的同源性較高；兔MT2基因與人、大鼠、小鼠和猩猩的同源性較高；兔MT3基因與牛、狗、人、大鼠、野豬、小鼠和綿羊的同源性較高。對包括兔在內(nèi)的不同

3、哺乳動物MT1，MT2和MT3氨基酸序列構建NJ系統(tǒng)進化樹。
　　 對兔MT1，MT2和MT3基因進行生物信息學分析，預測出其編碼蛋白分子量分別約為6.8kDa、7.2kDa和14.25kDa、等電點分別為5.12、5.34和5.32。兔MT1存在5個疏水區(qū)、3個潛在的磷酸化位點、存在10個可能二硫鍵以維持其立體結(jié)構。兔MT2存在5個疏水區(qū)、2個潛在磷酸化位點、存在10個可能二硫鍵以維持其立體結(jié)構。兔MT3存在1個潛在的N糖基化

4、位點199處、1個主要的疏水區(qū)、2個潛在的磷酸化位點、存在可能的10個二硫鍵以維持其立體結(jié)構；通過二級結(jié)構預測，發(fā)現(xiàn)兔MT1的二級結(jié)構由59個氨基酸殘基組成的無規(guī)則卷曲形成，占96.72％；MT2的二級結(jié)構有58個氨基酸殘基形成無規(guī)則卷曲和3個氨基酸殘基形成延伸鏈，分別占95.08％和4.92％；MT3的二級結(jié)構是以1個a-螺旋為基礎的，a螺旋由6個氨基酸殘基形成，占9.09％；螺旋之間為無規(guī)則卷曲，由54個氨基酸殘基形成，占81.82