豬TIM1和TIM3基因的特征與功能分析.pdf

1、CD4+T細(xì)胞遇到抗原激活后至少分化為兩類效應(yīng)細(xì)胞Th1和Th2。Th1細(xì)胞分泌以IFN-γ為標(biāo)志的細(xì)胞因子并介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)病原體的免疫應(yīng)答,它的紊亂可導(dǎo)致遲發(fā)型超敏反應(yīng)、自身免疫疾病如實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦炎和Ⅰ型糖尿病。Th2細(xì)胞分泌以IL-4為標(biāo)志的細(xì)胞因子并介導(dǎo)細(xì)胞外病原體的免疫應(yīng)答,它的紊亂可導(dǎo)致哮喘和過(guò)敏性疾病。Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞相互之間存在著互相調(diào)節(jié),當(dāng)Th1細(xì)胞比例占優(yōu)時(shí)可以調(diào)節(jié)哮喘以及過(guò)敏性疾病,Th2細(xì)胞比例占優(yōu)時(shí)可以抑

2、制自身免疫性疾病。研究表明TIM1和TIM3分別是調(diào)節(jié)Th2細(xì)胞和Th1細(xì)胞的重要基因,此外TIM1和TIM3基因還存在與哮喘和過(guò)敏癥等疾病相關(guān)的多態(tài)位點(diǎn)。因而TIM1和TIM3基因的表達(dá)調(diào)控和功能對(duì)Th1與Th2細(xì)胞之間的相對(duì)平衡以及機(jī)體的免疫力具有重要影響。
　　 本研究通過(guò)生物信息學(xué)和比較基因組學(xué)方法克隆了豬TIM1和TIM3基因的完整編碼區(qū),利用分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)技術(shù),從核酸序列及細(xì)胞兩個(gè)水平上對(duì)其特征進(jìn)行了研究,主

3、要取得了如下研究結(jié)果:
　　 (1)通過(guò)生物信息學(xué)和比較基因組學(xué)克隆了豬TIM1基因和TIM3基因的完整CDS區(qū),TM1和TIM3都位于豬第16號(hào)染色體上而且彼此緊密相連。經(jīng)預(yù)測(cè)TIM1包括一個(gè)1050bp的開(kāi)放閱讀框,編碼蛋白349個(gè)氨基酸殘基,推測(cè)其有8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子。TIM3包括一個(gè)852bp的開(kāi)放閱讀框,編碼蛋白284個(gè)氨基酸殘基,推測(cè)其有7個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子,外顯子和內(nèi)含子之間序列銜接遵循GT-AG規(guī)則。

4、>　　 (2)組織表達(dá)譜顯示TIM1 mRNA在正常各個(gè)組織中表達(dá)均比較低,而TIM3mRNA在各個(gè)組織中表達(dá)高低不等。TIM1和TIM3 mRNA在脾中表達(dá)都相對(duì)最高,而在肌肉中幾乎都不表達(dá)。
　　 (3)亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示TIM3蛋白定位于細(xì)胞膜上。
　　 (4)在TIM3基因的第2、第3、第5、第7以及啟動(dòng)子上發(fā)現(xiàn)了多個(gè)SNP位點(diǎn),并在第2外顯子的一個(gè)SNP位點(diǎn)上應(yīng)用AccI-RFLP方法在溫氏群體中進(jìn)行檢測(cè),發(fā)

5、現(xiàn)該位點(diǎn)與紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)顯著相關(guān)(P=0.0409),與平均紅細(xì)胞血紅蛋白量(MCH)顯著相關(guān)(P=0.0294)；對(duì)于17日齡仔豬,該位點(diǎn)與紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)極顯著相關(guān)(P=0.0089),與紅細(xì)胞壓積(HCT)顯著相關(guān)(P=0.0168)；對(duì)于32日齡仔豬,該位點(diǎn)與淋巴細(xì)胞(％)(LYM)極顯著相關(guān)(P=0.0048),與淋巴細(xì)胞絕對(duì)值(LY)顯著相關(guān)(P=0.033)。
　　 (5)克隆了豬TIM3基因5'側(cè)翼區(qū)大