大腸埃希菌超廣譜β-內(nèi)酰胺酶、頭孢菌素酶流行特性及耐藥相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　 調(diào)查溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院近五年臨床分離的大腸埃希菌臨床感染情況和耐藥特性，研究大腸埃希菌超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)和頭孢菌素酶(AmpC)產(chǎn)生情況、基因分布及流行特性，分析不同基因型水解底物的差異，初步探討質(zhì)粒介導(dǎo)和克隆株播散在大腸埃希菌ESBLs傳播中的作用，為臨床合理使用抗菌藥物、控制耐藥性的傳播提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1．回顧性調(diào)查2006年～2010年每年1～5月間臨床分

2、離的657株大腸埃希菌的分布情況；VITEK-60全自動(dòng)微生物分析儀和K-B紙片擴(kuò)散法檢測(cè)其對(duì)氨芐西林、頭孢唑啉、頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢匹美、氨芐西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢哌酮/舒巴坦、復(fù)方新諾明、慶大霉素、妥布霉素、左旋氧氟沙星、環(huán)丙沙星、呋喃妥因、美洛培南和亞胺培南的耐藥性。
　　 2．選取2006年～2010年每年1～2月份臨床分離的大腸埃希菌共140株，雙紙片增效試驗(yàn)檢測(cè)其ESBLs表型。
　　 3

3、．聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)86株ESBLs表型陽性的大腸埃希菌的基因(TEM,SHV,VEB,PER,GES,TLA,IBC,CTX-M-1,CTX-M-2,CTX-M-8,CTX-M-9，OXAⅠ，OXAⅡ，OXAⅢ，OXAⅣ和OXAⅤ)和140株大腸埃希菌AmpC酶基因(CIT，MOX，DHA，ACC，EBC，F(xiàn)OX)。隨機(jī)抽取部分ESBLs基因進(jìn)行DNA測(cè)序。
　　 4．接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)驗(yàn)證質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥基因的可轉(zhuǎn)移性。

4、r>　　 5．脈沖場(chǎng)凝膠電泳技術(shù)(PFGE)分析產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌株間的同源性。
　　 結(jié)果：
　　 1.657株大腸埃希菌主要來源于尿液標(biāo)本，占47.5％(312株)，其次為血液16.0％(105株)和痰液12.2％(80株)。所檢出的大腸埃希菌主要來源于監(jiān)護(hù)病房(ICU)、普外科(包括肛腸外科，神經(jīng)外科，心外科等)、呼吸內(nèi)科、燒傷科，超過總分離菌株的60％，存在較明顯的病區(qū)集中趨勢(shì)。
　　 2.2006

5、年～2010年我院產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的檢出率呈逐年上升趨勢(shì)，從2006年的54.5％增高到2010年的70.7％，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且近5年我院大腸埃希茵對(duì)多種抗菌藥物的耐藥率逐年上升，其中，2010年大腸埃希菌對(duì)頭孢唑啉、頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢匹美、復(fù)方新諾明、左旋氧氟沙星、環(huán)丙沙星和頭孢哌酮/舒巴坦的耐藥率比2006年的明顯增高。
　　 3.140株大腸埃希菌中ESBLs表型試驗(yàn)陽性的有86株，陽性率為61.4％。86株E

6、SBLs表型陽性菌株中檢測(cè)到ESBLs基因陽性的有80株，檢出率為93.0％。其中有61株攜帶CTX-M-9型基因，30株攜帶CTX-M-1型基因，23株攜帶TEM型基因，1株攜帶SHV型基因，其余基因均未有檢出，同時(shí)攜帶兩種以上ESBLs基因的有27株，占33.8％。140株大腸埃希菌中檢測(cè)到AmpC酶基因陽性的有18株，陽性率為12.9％，其中有10株攜帶DHA型基因，9株攜帶CIT型基因，1株攜帶FOX型基因，其余基因均未有檢出，

7、同時(shí)攜帶兩種以上AmpC酶基因的有2株，占11.1％。18株AmpC酶基因陽性菌株中同時(shí)檢測(cè)出ESBLs基因的有8株。選取其中TEM型基因陽性菌株4株，CTX-M-9型基因陽性菌株7株，CTX-M-1型基因陽性菌株3株進(jìn)行測(cè)序，經(jīng)比對(duì)(BLAST)顯示，4株TEM型基因陽性菌株均為TEM-1型，7株CTX-M-9型基因陽性菌株均為CTX-M-14型，3株CTX-M-1型基因陽性菌株均為CTX-M-15型。
　　 4．不同基因型大

8、腸埃希菌對(duì)頭孢菌素類藥物的耐藥率存在一定差異性，攜帶CTX-M型基因的菌株對(duì)頭孢曲松的耐藥率明顯高于頭孢他啶，而攜帶CTX-M-1型基因的菌株對(duì)頭孢他啶和頭孢匹美的耐藥率明顯高于攜帶CTX-M-9型基因的菌株。
　　 5．選取38株ESBLs陽性株作為供體菌，耐利福平的大腸埃希菌EC600作為受體菌進(jìn)行接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)，結(jié)果顯示，有28株接合子成功轉(zhuǎn)移了ESBLs基因，其中有部分?jǐn)y帶兩種或以上基因型的野生株只轉(zhuǎn)移了其中一種基因型，其

9、余接合子的基因型與供體菌一致。
　　 6．選取ESBLs陽性率較高年份(2009年～2010年)的產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌25株，利用PFGE技術(shù)分析其同源性，通過NTSYSpc軟件繪制各菌株間的相似樹狀圖，發(fā)現(xiàn)有少數(shù)菌株存在同源性，呈散發(fā)流行。
　　 結(jié)論：
　　 1．臨床分離的大腸埃希菌大多來源于泌尿道感染，其次是血液感染和呼吸道感染，且主要集中于監(jiān)護(hù)病房和外科病房等科室。
　　 2．大腸埃希菌對(duì)多種抗

10、菌藥物的耐藥率都有增高趨勢(shì)，對(duì)部分抗菌藥物呈現(xiàn)高度耐藥，尤其是對(duì)青霉素類和頭孢菌素類藥物，且具有明顯的多重耐藥性。
　　 3．大腸埃希菌超廣譜β-內(nèi)酰胺酶基因型以CTX-M-9型為主，其次檢出的基因型有CTX-M-1、TEM和SHV;頭孢菌素酶檢出的基因型為DHA、CIT和FOX，主要以DHA和CIT為主。
　　 4．不同基因型的ESBLs對(duì)頭孢菌素類藥物的水解能力不同，CTX-M型ESBLs對(duì)頭孢曲松的水解能力要高于對(duì)