匹伐他汀通過(guò)BDNF--TrKB信號(hào)通路對(duì)大鼠皮層神經(jīng)元的保護(hù)作用.pdf

1、缺血性腦卒中可嚴(yán)重?fù)p傷腦神經(jīng)功能，導(dǎo)致肢體殘疾甚至死亡，是中國(guó)目前主要致死致殘?jiān)蛑?，給社會(huì)和家庭帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。2013年一項(xiàng)全國(guó)31個(gè)省市，包括155個(gè)城鄉(xiāng)中心，共計(jì)480687人的調(diào)查研究顯示:腦卒中的年齡標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)病率為246.8/10萬(wàn)人/年，年齡標(biāo)準(zhǔn)化死亡率為114.8/10萬(wàn)/年，其中缺血性腦卒占77.8％[1]。腦缺血可導(dǎo)致腦組織細(xì)胞嚴(yán)重?fù)p傷，血流再通過(guò)后，繼之的炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激等引起的再灌注進(jìn)一可步加重腦組織損傷，如

2、何保護(hù)腦組織免受缺血再灌注損傷，成為目前主要研究?jī)?nèi)容。他汀類藥物是一種3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，臨床上廣泛應(yīng)用于降低血脂，是冠心病和腦梗死的一級(jí)和二級(jí)預(yù)防用藥[2,3]。越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)，他汀具有免疫調(diào)節(jié)、穩(wěn)定斑塊、抗氧化應(yīng)激、神經(jīng)保護(hù)等不依賴其降脂機(jī)制的作用[4]。匹伐他汀(pitavastatin，PTV)是第三代他汀類降脂藥，體內(nèi)少量通過(guò)肝藥酶CYP2C9代謝，安全性較高，且較其他類他汀而言，

3、PTV不增加糖尿病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)[5]。腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)高表達(dá)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，對(duì)神經(jīng)元生長(zhǎng)、分化、存活等至關(guān)重要，有臨床研究發(fā)現(xiàn)，他汀治療可明顯提高動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗塞病人的神經(jīng)功能，這一作用可能與其升高血清腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)有關(guān)。亦研究指出，BDNF可通過(guò)激活其受體TrkB，起抗缺

4、氧損傷的作用。本研究通過(guò)對(duì)原代培養(yǎng)的皮層神經(jīng)元進(jìn)行氧糖剝奪(OGD)及復(fù)氧處理，模擬腦缺血再灌注損傷，進(jìn)一步探討PTV是否可通過(guò)BDNF-TrkB信號(hào)通路對(duì)缺氧再灌注損傷后神經(jīng)元具有保護(hù)作用。
　　目的:
　　通過(guò)觀察不同濃度匹伐他汀(PTV)溶液對(duì)氧糖剝奪(OGD)再?gòu)?fù)氧后原代培養(yǎng)的皮層神經(jīng)元的作用，探索匹伐他汀是否對(duì)具有神經(jīng)保護(hù)作用及其適當(dāng)濃度范圍;并探討其中的神經(jīng)保護(hù)作用的細(xì)胞分子機(jī)制，與BDNF-TrkB信號(hào)通路的聯(lián)

5、系。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)新生SD大鼠皮層神經(jīng)元，分為正常對(duì)照組、匹伐他汀處理組、氧糖剝奪組，氧糖剝奪+匹伐他汀處理組，匹伐他汀的濃度設(shè)為1μmol/L，15μmol/L，30μmol/L，MTT法測(cè)各組細(xì)胞活性(OD值);免疫熒光染色觀察各處理組神經(jīng)元形態(tài)變化，計(jì)數(shù)神經(jīng)元樹(shù)突數(shù)目及長(zhǎng)度:提取各處理組蛋白，western blot法測(cè)各組蛋白dimmer-mBDNF、homo-mBDNF、TrkB的表達(dá)量。
　　結(jié)

6、果:
　　1.正常對(duì)照組與單純1μmol/L，15μmol/L，30μmol/L匹伐他汀處理組間OD值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）;氧糖剝奪及復(fù)氧處理后，皮層神經(jīng)元活性明顯降低(P＜0.001);1μmol/L和15μmol/L匹伐他汀+OGD處理組較OGD組OD值增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);1μmol/L匹伐他汀+OGD組與15μmol/L匹伐他汀+OGD處理組組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;1μmol/L和15μmol

7、/L匹伐他汀處理+OGD處理組較30μmol/L匹伐他汀+OGD組，OD值顯著升高(P＜0.05);30μmol/L匹伐他汀+OGD組與對(duì)照組OD值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2.OGD處理組神經(jīng)元樹(shù)突分支數(shù)目較正常對(duì)照組顯著減少，樹(shù)突長(zhǎng)度較正常對(duì)照組短(P＜0.05);相較于OGD組，OGD+1μmol/L和15μmol/L匹伐他汀處理組神經(jīng)元樹(shù)突分支數(shù)目增多(P＜0.05），但樹(shù)突長(zhǎng)度無(wú)明顯增長(zhǎng)（P＞0.05），氧

8、糖剝奪+30μmol/L匹伐他汀處理組樹(shù)突分支數(shù)目及樹(shù)突長(zhǎng)度均無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　3.OGD組與正常對(duì)照組比較蛋白dimmer-BDNF,homo-BDNF，TrkB的表達(dá)量均明顯降低(P＜0.05);1μmol/L，15μmol/L匹伐他汀處理組蛋白dimmer-mBDNF,homo-mBDNF，TrkB的表達(dá)量較正常對(duì)照組增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）;30μmol/L匹伐他汀處理組較正常對(duì)照組dimme

9、r-BDNF,mBDNF，TrkB的表達(dá)量降低(P＜0.05);OGD+1μmol/L匹伐他汀，OGD+15μmol/L匹伐他汀處理組蛋白dimmer-BDNF,mBDNF，TrkB的表達(dá)量較OGD組增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。OGD+30μmol/L匹伐他汀處理組較正常對(duì)照組dimmer-BDNF,mBDNF，TrkB的表達(dá)量降低(P＜0.05);OGD+1μmol/L、15μmol/L、30μmol/L匹伐他汀處理組蛋白

10、dimmer-BDNF,mBDNF，TrkB的表達(dá)量均較相應(yīng)濃度的匹伐他汀處理組降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.氧糖剝奪后復(fù)氧處理對(duì)神經(jīng)元有損傷作用。
　　2.匹伐他汀處理對(duì)正常神經(jīng)元無(wú)明顯作用;對(duì)氧糖剝奪后復(fù)氧的神經(jīng)元有保護(hù)作用，該保護(hù)作用具有濃度依賴性。
　　3.匹伐他汀促進(jìn)氧糖剝奪后復(fù)氧對(duì)神經(jīng)元樹(shù)突的再生，該作用具有濃度依賴性
　　4.匹伐他汀可能通過(guò)BDNF-TrkB信號(hào)通路保護(hù)缺氧復(fù)氧