非酒精性脂肪肝病患者血漿Klotho甲基化和氧化應(yīng)激損傷的分析.pdf

1、目的：近年來非酒精性脂肪肝病(Non alcoholic fatty liver disease，NAFLD)的發(fā)病率持續(xù)增加，但是其發(fā)病機(jī)制尚不明確。氧化應(yīng)激損傷被認(rèn)為在NAFLD的“二次打擊”中扮演著重要角色。Klotho與氧化應(yīng)激和代謝性疾病關(guān)系密切。Klotho啟動(dòng)子甲基化調(diào)控Klotho的表達(dá)。本研究目的在于探討NAFLD患者血漿氧化應(yīng)激損傷水平和Klotho基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)，為NAFLD的發(fā)病機(jī)制和干預(yù)措施提供有力的理論

2、和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：根據(jù)本研究制定的納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，采用隨機(jī)數(shù)字表法選擇56名在西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院確診為NAFLD的患者，另選50名健康人群作為對(duì)照組。收集所入選人群的一般資料，包括年齡、性別、身高、體重等。收集兩組人群靜脈血，高密度脂肪蛋白（high-density lipoprotein，HDL）、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein，LDL)、總膽固醇(total cholesterol，TC)

3、、甘油三酯(triglyceride，TG)采用全自動(dòng)血生化分析儀檢測。全自動(dòng)血生化分析儀檢測谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotransferase，AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase，ALT)和谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(Glutamyl transpeptidase，GGT)。采用酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)試劑盒檢測血漿超氧化物歧

4、化酶(Superoxide Dismutase，SOD)、丙二醛(Malondialdehyde，MDA)和過氧化氫酶(Catalase，CAT)水平檢測。實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time Quantitative PCR Detecting System，qPCR)和蛋白質(zhì)印跡法(Western-blot)分別檢測血漿Klotho的基因和蛋白水平表達(dá)。相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析。Klotho啟動(dòng)子甲基化水平采用甲基化特異

5、性PCR(Methylation-specific PCR，MS-PCR)檢測。采用軟件SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用D'Agootino-Pearson法對(duì)計(jì)量數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的采用t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)用Mean±SD表示。非正態(tài)分布采用獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)Mann-Whitney法，數(shù)據(jù)用Median±IQR。率或構(gòu)成比比較采用卡方檢驗(yàn)。資料相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　

6、結(jié)果：觀察組體重明顯高于對(duì)照組(t=4.616，P＜0.0001);觀察組BMI指數(shù)明顯高于對(duì)照組（t=3.756，P=0.0003）;觀察組TG明顯高于對(duì)照組（t=4.576，P＜0.0001）;觀察組TC明顯高于對(duì)照組（t=5.411，P＜0.0001）;觀察組LDL明顯高于對(duì)照組(t=2.912，P=0.0044);觀察組ALT明顯高于對(duì)照組（t=9.787，P＜0.0001）。與對(duì)照組相比觀察組血漿SOD含量（t=3.254，P

7、=0.0015）和CAT（t=9.338，P＜0.0001）明顯降低。觀察組人群ALT水平與血漿SOD含量呈負(fù)相關(guān)（r=-0.3581，P=0.0067），與CAT含量呈負(fù)相關(guān)（r=-0.3317，P=0.0125）。通過對(duì)兩組人群血漿中Klotho的mRNA的檢測發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，觀察組Klotho基因mRNA(t=19.13，P＜0.0001)和蛋白表達(dá)（t=15.30，P＜0.0001）均明顯降低。觀察組人群Klotho蛋白表達(dá)