CXCR4通過調(diào)控PI3K通路活性對(duì)大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞生物功能影響機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究CXCR4通過調(diào)控PI3K通路活性對(duì)大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的生物功能學(xué)影響的機(jī)制
　　方法：⑴構(gòu)建CXCR4過表達(dá)rAAV6病毒載體;感染SD大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞;運(yùn)用RT-PCR方法、Western Blot方法檢測(cè)SD大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞中CXCR4的表達(dá)水平；⑵運(yùn)用CCK8實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)CXCR4過表達(dá)對(duì)缺氧預(yù)處理的SD大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖能力的影響;運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)評(píng)價(jià)CXCR4過表達(dá)對(duì)缺氧預(yù)處理的SD大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞凋亡情

2、況的影響;運(yùn)用運(yùn)用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)CXCR4過表達(dá)對(duì)缺氧預(yù)處理的SD大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞遷移能力的影響；⑶運(yùn)用Western Blot方法檢測(cè)缺氧預(yù)處理/CXCR4過表達(dá)對(duì)BM-EPCs的PI3K/Akt信號(hào)通路表達(dá)的影響；⑷運(yùn)用CCK8實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)LY294002（PI3K抑制劑）對(duì)CXCR4過表達(dá)的缺氧預(yù)處理的SD大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖能力的影響;運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)評(píng)價(jià)LY294002對(duì)CXCR4過表達(dá)的缺氧預(yù)處理的SD大鼠骨髓

3、內(nèi)皮祖細(xì)胞凋亡情況的影響;運(yùn)用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)LY294002對(duì)CXCR4過表達(dá)的缺氧預(yù)處理的SD大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞遷移能力的影響。
　　結(jié)果：①CXCR4過表達(dá)組的內(nèi)皮祖細(xì)胞中CXCR4核酸、蛋白的表達(dá)均高于空載體對(duì)照組(p＜0.01)；②CCK8實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)分別得出缺氧預(yù)處理對(duì)BM-EPCs具有抑制增殖(p＜0.05)、遷移(確定單一變量，各自兩組間的遷移細(xì)胞數(shù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，p＜

4、0.01)，增加凋亡（確定單一變量，各自兩組間的凋亡百分比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p＜0.01）; CCK8實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)分別證實(shí)了CXCR4過表達(dá)對(duì)缺氧預(yù)處理的BM-EPCs具有促進(jìn)其增殖（確定單一變量，各自兩組間的OD值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，p＜0.05）、遷移確定單一變量，各自兩組間的遷移細(xì)胞數(shù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，p＜0.01)的作用，抑制其凋亡(確定單一變量，各自兩組間的凋亡百分比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p＜0.01)；③W

5、estern Blot結(jié)果顯示缺氧預(yù)處理可下調(diào)BM-EPCs的CXCR4/PI3K/Akt表達(dá);CXCR4過表達(dá)可上調(diào)經(jīng)缺氧預(yù)處理的BM-EPCs的CXCR4/PI3K/Akt表達(dá)；④CCK8實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)分別證實(shí)了LY294002可消除CXCR4過表達(dá)對(duì)缺氧預(yù)處理的BM-EPCs增殖能力增強(qiáng)的作用（各自兩組間的OD值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，p＜0.05）、消除CXCR4過表達(dá)對(duì)缺氧預(yù)處理的BM-EPCs遷移能力增