一株莫拉氏菌新種的分離鑒定與特性研究.pdf

1、莫拉氏菌（moraxella），是一種革蘭氏陰性菌，有抗褪色傾向，歸屬于莫拉氏菌科。該菌多寄生于人或其它溫血動物的黏膜上，是一種機(jī)會性致病菌。莫拉氏菌通常為桿狀或球桿狀。桿菌短而飽滿，接近球形，球形菌通常較小，單個或成對存在。該菌在有氧環(huán)境下生長良好，在缺氧環(huán)境下可微弱生長。菌落不產(chǎn)生色素，通常氧化酶和觸酶陽性。不產(chǎn)酸以及碳水化合物。對青霉素敏感。DNA的G+Cmol％為40.0-47.5。
　　本研究從四川錦陽地區(qū)鴨場分離到一株

2、革蘭氏陰性球菌。該菌伴隨鴨疫里默氏菌被分離。并在此基礎(chǔ)上對其形態(tài)學(xué)、培養(yǎng)特性、生長特性、生化特性等進(jìn)行了考察。其16S rRNA基因序列與莫拉氏菌屬細(xì)菌同源性最高可達(dá)到97％。初步鑒定為莫拉氏菌屬的一個新種。該分離株在顯微鏡下可見短桿狀，雙球或短鏈狀排列。多數(shù)成對排列，亦有單個排列。在巧克力平板上形成圓形、淡黃色、邊緣整齊、表面光滑、不透明、濕潤、黏稠、扁平、大小均一的菌落。在麥康凱培養(yǎng)基上不生長。API20NE生化實(shí)驗(yàn)表明該菌株不水解

3、明膠尿素和七葉苷。不同化葡萄糖、檸檬酸、苯乙酸、阿拉伯糖、甘露糖、甘露醇、N-乙酰-葡萄糖胺、麥芽糖、葡萄酸鹽、癸酸、已二酸。硝酸鹽還原呈陰性。菲發(fā)酵菌實(shí)驗(yàn)表明該菌株與精氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、枸櫞酸鹽、尿素、七葉苷、木糖、氧化酶等反應(yīng)呈陽性。與硫化氫、葡萄糖、ONPG、蔗糖、麥芽糖、硝酸鹽還原、蛋白胨水的反應(yīng)呈陰性。對該菌株進(jìn)行了全基因組序列的測定，經(jīng)序列拼接，得到一條完整的基因組序列，該基因組長度為549960bp，G+C含量為45.

4、87％?；?6S rRNA系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建。結(jié)果表明該分離株處于莫拉氏菌屬的進(jìn)化分支內(nèi)，與兔莫拉氐菌、多動物莫拉氏菌同源性較高。最后為測定該菌株與莫拉氏菌屬種內(nèi)的其它細(xì)菌的親緣關(guān)系，本研究以該菌株的全基因組序列為研究對象，進(jìn)行了平均核苷酸同源性分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)該菌株的全基因組與莫拉氏菌屬種內(nèi)細(xì)菌的全基因組對比得到ANIb值的范圍為69.23％～74.21％，ANIm值的范圍為84.02％～87.16％。該菌株的甲基萘醌組分為MK-7(9

5、2％)、MK-6(5％)和MK-8(2％)。菌株極性脂為diphosphatidyl(DPG)、phosphatidyl ethanolamine(PE)、glycolipid(GL)、unidentified phospholipids(UPL)和 undentified aminophospholipids(UAPL)。基于以上這些多相性分析結(jié)果，建議將該菌株界定為莫拉氏菌屬的一個新種，并命名為Moraxellaanas.sp.no

6、v(RCAD00137)。
　　為了解該分離菌株是否對鴨有致病性，本研究進(jìn)行了雛鴨攻毒實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明該菌對健康雛鴨不致死。小鼠攻毒試驗(yàn)表明該菌對小鼠不致死。此外，鴨胚感染實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)該菌株對鴨胚不致死。
　　采用K-B藥敏紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明該分離菌株對青霉素G、氨芐西林、慶大霉素、氟苯尼考、萘啶酸、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、克林霉素、紅霉素螺旋霉素、阿奇霉素、新諾明、復(fù)方新諾明、氯霉素、利福平等抗生素耐藥。對亞胺培南