黃花柳微衛(wèi)星富集文庫(kù)構(gòu)建及標(biāo)記篩選.pdf

1、　　柳樹是楊柳科柳屬樹種的統(tǒng)稱。柳屬樹種十分豐富，世界上共有500多個(gè)喬灌木樹種，為重要的林木類群，具有重要的生態(tài)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。柳樹種間雜交及無性繁殖容易，有些樹種世代很短，一年生就能開花結(jié)實(shí)，是林木中進(jìn)行遺傳學(xué)研究的理想材料。微衛(wèi)星(SSR)是指由1-6個(gè)核苷酸為單位、呈串聯(lián)重復(fù)的DNA序列，廣泛分布于真核生物的整個(gè)基因組中。微衛(wèi)星標(biāo)記具有共顯性、多態(tài)性高、重復(fù)性好等特點(diǎn)，是較為理想的分子標(biāo)記。被廣泛地用于群體遺傳研究、遺傳圖譜構(gòu)建、數(shù)

2、量性狀基因QTL定位、輔助選擇等。由于可用于柳樹研究的微衛(wèi)星標(biāo)記很少，限制了對(duì)柳樹這些領(lǐng)域的研究，急需開發(fā)適于柳樹研究的SSR標(biāo)記，以促進(jìn)柳樹分子遺傳學(xué)研究的發(fā)展。本研究從幾個(gè)方面來探索柳屬SSR引物的開發(fā)，重點(diǎn)構(gòu)建黃花柳微衛(wèi)星富集文庫(kù)來開發(fā)，首次在柳屬中提出了一種高效的微衛(wèi)星篩選分離策略：以生物素標(biāo)記的(CT)15和(GT)45為探針進(jìn)行雜交，借助磁珠篩選出含微衛(wèi)星的Dau3AⅠ酶切片段，共得到1056個(gè)質(zhì)粒，然后用地高辛標(biāo)記(CT)

3、8和(GT)8混合探針點(diǎn)雜交對(duì)384個(gè)克隆進(jìn)行二次篩選；從沒經(jīng)過二次篩選的克隆中隨機(jī)挑取360個(gè)和經(jīng)過二次篩選的24個(gè)陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序，發(fā)現(xiàn)含微衛(wèi)星的克隆有183個(gè)(360個(gè)文庫(kù)克隆中，162個(gè)克隆中含微衛(wèi)星序列(45﹪)，24個(gè)二次雜交陽(yáng)性克隆中有21個(gè)合有微衛(wèi)星序列(89﹪))。最后得到的44個(gè)非同源性克隆中，共含有53個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)；對(duì)微衛(wèi)星種類進(jìn)行分析，其中(TC/AG)n，(GA/CT)n，(CA/GT)n比例最高，共占74﹪，