琯溪蜜柚黑斑病菌的生理特性及綠色熒光蛋白標記.pdf

1、本文從琯溪蜜柚黑斑病菌Phyllosticta citriasiana的生長特性、寄主范圍、代謝活性組分、遺傳轉(zhuǎn)化及綠色熒光蛋白標記等內(nèi)容進行研究，取得結(jié)果如下：
　　P. citriasiana菌絲生長對溫度敏感，人工培養(yǎng)條件下，培養(yǎng)溫度≥40℃或≤10℃時，菌絲生長完全受抑制。培養(yǎng)溫度在15℃-35℃之間，菌絲生長速率呈現(xiàn)先增長后驟降的趨勢，在培養(yǎng)溫度為25℃時菌絲生長速率最快，7d的菌落直徑達3.41cm，30℃次之（3.2

2、5cm），它們與15℃（1.29cm）、20℃(1.49cm)和35℃(0.68cm)的生長速率存在顯著差異，表明25-30℃較適宜該菌菌絲生長。菌絲在SOA培養(yǎng)基生長速率最快（9d），與在 OA培養(yǎng)基上的生長速率存在顯著差異，OA培養(yǎng)基上添加2％的山梨醇可以促進菌絲的生長。菌絲生長對光照強度敏感，光照強度為0 Lux（黑暗條件）時生長速率最快，而光照強度為1980 Lux條件下的生長速率顯著降低。P. citriasiana分生孢子在

3、1%葡萄糖溶液、10%葡萄糖溶液和水中的萌發(fā)率隨著萌發(fā)時間的延長（0-72h），萌發(fā)率先升高后降低，在萌發(fā)48h時，萌發(fā)率最高，分別為61.4%、39.1%、52.7%。在水中添加1%或10%的葡萄糖，能使分生孢子24h的萌發(fā)率顯著提高，但在水中萌發(fā)48h的萌發(fā)率與在1%葡萄糖中萌發(fā)48h的萌發(fā)率差異不顯著，表明1%或10%葡萄糖溶液僅在短時間內(nèi)促進P. citriasiana分生孢子萌發(fā)。分生孢子在0.7M NaCl溶液中的萌發(fā)率低，

4、最大值僅為16.4%（72h內(nèi)）。菌絲和分生孢子的致死溫度為≥55℃水浴15min。
　　P. citriasiana對柑橘屬28份植物的致病性測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，P. citriasiana的致病譜比較窄，除了能侵染琯溪蜜柚外，還可以侵染柚子中的龍柚1號、龍柚2號、葡萄柚、坪山柚，以及檸檬中的費米耐勞白花2號檸檬、五峰2號檸檬和海南藥用檸檬。
　　P. citriasiana菌絲的培養(yǎng)濾液對琯溪蜜柚葉片具有生物活性，在刺傷部位形

5、成黃褐色斑，類似于P. citriasiana侵染的發(fā)病癥狀。培養(yǎng)濾液的活性組分較耐高溫，在80℃水浴處理15min后，仍對琯溪蜜柚葉片具有生物活性。將濾液通過直接減壓濃縮或乙酸乙酯萃取濃縮，甲醇溶解過濾后，均在367nm處具有較強的紫外吸收峰。濃縮物經(jīng)無菌水溶解后，能使刺傷的鵝絨藤Cynanchum chinense葉片形成黃黑色斑，而對刺傷的勝紅薊Ageratum conyzoides葉片無生物活性。
　　P. citrias

6、iana菌絲在CM、SCM和0.6M TB-Sucrose液體培養(yǎng)基上，25℃、120rpm條件下振蕩培養(yǎng)3d，可形成鮮白或黃白的菌絲團或菌絲球。單獨使用裂解酶或崩潰酶裂解菌絲形成的原生質(zhì)體較少，分別用35mg/mL裂解酶和10mg/mL崩潰酶裂解菌絲3h，形成的原生質(zhì)體濃度低，僅為8.167×105個/mL和1.0×105個/mL。而用30mg/mL裂解酶+15mg/mL崩潰酶能取得最佳的裂解效果，形成的原生質(zhì)體濃度達1.24×107