腎素及其受體對大鼠血管平滑肌細胞增殖和頸動脈損傷后內(nèi)膜增生的影響及機制.pdf

1、研究背景和目的：經(jīng)皮冠狀動脈介入術(shù)(percutaneous coronary intervention, PCI)已成為目前國內(nèi)外廣泛應(yīng)用的治療冠心病的有效手段，但PCI 術(shù)后半年內(nèi)再狹窄(restenosis, RS） 率高達10％～30％，藥物洗脫支架雖然可減少RS的發(fā)生，但術(shù)后RS 率仍有10％左右，且費用昂貴，此外，藥物洗脫支架植入后存在后期、遠期支架內(nèi)血栓形成而危及生命等問題，因而探索有效的RS 防治措施一直是心血管病學(xué)領(lǐng)域

2、的研究熱點。大量研究表明，血管平滑肌細胞（vascular smooth muscle cell,vsMCs)的增殖、遷移是新生內(nèi)膜形成及RS 發(fā)生的病理基礎(chǔ)。近年來，腎素血管緊張素系統(tǒng)中越來越多新成員的發(fā)現(xiàn)使人們對腎素血管緊張素系統(tǒng)的認識更加全面和深刻。2002年，Nguyen等首次克隆發(fā)現(xiàn)腎素(原)受體[(pro)reninreceptor, (P)RR]。自從(P)RR 被發(fā)現(xiàn)以來，關(guān)于(P)RR在腎臟和心臟中的生理及病理的作用受

3、到越來越多的重視。Schefe等報道，腎素(renin)通過(P)RR 促進大鼠H9c2 心肌細胞的增殖并減少細胞的凋亡。Ichihara等報道，腎素原的柄區(qū)肽(handle region peptide, HRP)，一種(P)RR的阻斷劑，可抑制糖尿病腎病和心臟纖維化的發(fā)展。這些研究表明，(P)RR在各種生理及病理生理機制，特別是心血管疾病和糖尿病腎病的發(fā)病中發(fā)揮著十分重要的作用。一些腎素原在細胞內(nèi)轉(zhuǎn)化成腎素，另一些腎素原直接進入血液

4、循環(huán)。血管組織對腎素原攝取較多，因此血管可能是腎素原轉(zhuǎn)化為腎素的主要部位。而且血管平滑肌細胞已被證實存在腎素原受體，并且研究已證實，腎素和前腎素可通過(P)RR 促進血管平滑肌細胞的增殖。因此，我們推斷腎素原受體系統(tǒng)(The receptor-associated prorenin system, RAPS)將在RS的發(fā)生中起到十分重要的作用。故本研究將分別觀察((P)RR在體外血管平滑肌細胞增殖中的作用及動脈損傷模型新生內(nèi)膜中的作用。

5、近年來的研究證實NADPH 氧化酶是ROS 生成的主要酶系。與吞噬細胞中NADPH氧化酶所生成的ROS不同，NADPH 氧化酶所產(chǎn)生的ROS不主要起細胞防御功能，而是作為第二信使，參與細胞分化、增殖、凋亡的調(diào)節(jié)。在不同種類的細胞中發(fā)現(xiàn)了一系列NADPH 氧化酶催化亞基即gp91phox的同源物，分別稱其為NOX1， NOX2 （gp91phox)，NOX3， NOX4， NOX5，DUOX1， DUOX2，后來被命名為NOX蛋白家族。其

6、中，在血管平滑肌細胞主要表達NOX1和NOX4。研究已證實，NOX1誘導(dǎo)的ROS 可促進血管平滑肌細胞的增殖，而NOX4 則與分化型的血管平滑肌細胞密切相關(guān)。因此，本研究將以NOX1為研究對象，進一步觀察NOX1介導(dǎo)的ROS在PP(R) 介導(dǎo)的血管平滑肌細胞增殖以及動脈損傷后內(nèi)膜增生中的作用。
　　 研究方法：本研究將分為以下四部分進行：實驗一合成并鑒定有效RNA 干擾質(zhì)粒，本部分實驗通過設(shè)計及構(gòu)建4對(P)RR的pcDNATM

7、6·2-GW/EmGFPmiR miRNA及1對陰性對照miRNA 干擾質(zhì)粒，通過DNA 測序進行鑒定。將干擾質(zhì)粒用LipofectamineTm2000轉(zhuǎn)染VSMCs，倒置熒光顯微鏡下觀察綠色熒光及流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率，reAltime-PCR及Western blot 檢測4對干擾質(zhì)粒、陰性對照質(zhì)粒對VSMCs (P)RR的mRNA及蛋白表達的影響。實驗二觀察腎素及其特異性受體對大鼠血管平滑肌細胞增殖、細胞周期素D1D1((((C

8、yclin D1D1))))及增殖細胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen Antigen,,,, PCNA PCNA）表達的影響，本部分實驗將分為兩部分：第一部分：探討不同濃度腎素對VSMCs 增殖、Cyclin D1及PCNA表達的影響，實驗分為以下五組：①空白組(None)：未加任何處理；②對照組(Control)：給予Losartan (AT1受體阻斷劑) 10-6 mol/L和PD123

9、319 (AT2 受體阻斷劑) 10-5 mol/L；③ Renin 10-10組：給予10-10mol/L Renin 處理；④Renin 10-9組：給予10-9mol/L Renin 處理；⑤Renin 10-8：給予10-8 mol/L Renin 處理。除空白組外，其余各組均給予Losartan 10-6 mol/L和PD123319 10-5 mol/L分別預(yù)處理30min， 以阻斷腎素的AngⅡ依賴性作用。第二部分：探討(

10、(P)RR對VSMCs 增殖、Cyclin D1及PCNA表達的影響，實驗分為以下六組：①空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(Negative)：轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒；②對照組(Control)：轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒后給予Losartan和PD123319 處理；③Renin組：給予10-9 mol/L Renin 處理；④(P)RR 干擾+Renin組：轉(zhuǎn)染(P)RR 干擾質(zhì)粒后給予10-9 mol/L Renin 處理；⑤血小板源性生長因子-BB（Platelet-Deri

11、ved Growth Factor BB，PDGF-BB）組：給予10nmol/L PDGF-BB 處理；⑥ (P)RR干擾+PDGF-BB組：轉(zhuǎn)染(P)RR 干擾質(zhì)粒后給予10nmol/L PDGF-BB 處理。除空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組外，其余各組均給予Losartan 10-6 mol/L和PD123319 10-5 mol/L分別預(yù)處理30min， 以阻斷腎素的AngⅡ依賴性作用。所有實驗步驟在同樣的條件下至少重復(fù)三次。實驗結(jié)束后，分別采用

12、CCK-8 法檢測細胞增殖，流式細胞術(shù)檢測各組細胞細胞周期， real-time PCR 法檢測各組CyclinD1、PCNA mRNA表達，western blot 法檢測CyclinD1、PCNA蛋白表達。實驗三觀察氧化應(yīng)激在腎素及其特異性受體促大鼠血管平滑肌增殖中的作用及機制，本部分實驗將以VSMCs為研究對象，分為以下兩部分：第一部分：探討DPI(NADPH 氧化酶抑制劑))))對腎素促VSMCs 增殖、Cyclin D1及PC

13、NA表達的影響，實驗分為以下七組：①空白組：未加任何處理；②對照組(Control+Los+PD123319)：給予Losartan 10-6 mol/L和PD123319 10-5 mol/L；③ Renin 10-10組：給予10-10mol/L Renin 處理；④Renin 10-9組：給予10-9mol/L Renin 處理；⑤Renin 10-8：給予10-8 mol/L Renin 處理。⑥Renin 10-9+DPI組：

14、給予10-5 mol/L DPI 處理30min后給予10-9mol/L Renin；⑦DPI組：給予10-5 mol/L DPI 處理；除空白組外，其余各組均給予Losartan 10-6 mol/L和PD123319 10-5mol/L分別預(yù)處理30min， 以阻斷腎素的AngⅡ依賴性作用。第二部分：探討((P)RR在腎素誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激中的作用，將實驗分為以下六組：①空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(Negative)：轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒；②對照組(Contr

15、ol)：轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒后給予losartan和PD123319 處理；③Renin組：給予10-9 mol/L Renin 處理；④(P)RR 干擾+Renin組：轉(zhuǎn)染(P)RR 干擾質(zhì)粒后給予10-9 mol/L Renin 處理；⑤ PDGF-BB組：給予10nmol/L PDGF-BB處理；⑥ (P)RR 干擾+PDGF-BB組：轉(zhuǎn)染(P)RR 干擾質(zhì)粒后給予10nmol/L PDGF-BB 處理。除空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組外，其余各組均給予lo

16、sartan 10-6mol/L和PD123319 10-5 mol/L分別預(yù)處理30min， 以阻斷腎素的AngⅡ依賴性作用。所有實驗步驟在同樣的條件下至少重復(fù)三次。實驗結(jié)束后，分別采用流式細胞術(shù)檢測各組細胞ROS 含量及細胞周期，黃嘌呤氧化酶法測定各組細胞SOD 活力；TBA 法測定各組細胞MDA 含量，real-time PCR 法檢測各組CyclinD1、PCNA和NOX1mRNA表達，western blot 法檢測Cycli

17、nD1、PCNA和NOX1mRNA表達。實驗四進一步觀察((P)RR在血管損傷后內(nèi)膜增生中的作用，本部分實驗通過建立大鼠頸動脈球囊損傷動物模型，將實驗動物分為假手術(shù)組(PBS，n=10，灌胃)、損傷組(PBS，n=10，灌胃)、低劑量HRP組(10μg/kg/d，n=10，尾靜脈注射)、高劑量HRP組(100μg/kg/d，n=10，尾靜脈注射)和陽性對照losartan組(100mg/kg/d，n=10，灌胃)。實驗過程中每天尾靜脈法

18、監(jiān)測鼠壓，于14天取損傷動脈，采集血液，進行以下指標檢測：HE 法觀察各組新生內(nèi)膜增生情況；黃嘌呤氧化酶法測定血管SOD 活力；TBA 法測定血管MDA 含量；realtimePCR 法檢測各組CyclinD1、PCNA和NOX1mRNA表達；western blot 法檢測CyclinD1、PCNA和NOX1mRNA表達。
　　 結(jié)果：1111實驗一(P)RR miRNA 干擾質(zhì)粒的構(gòu)建、篩選及轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化(1) 成功構(gòu)建了

19、(P)RR miRNA的有效干擾質(zhì)粒。(2)通過脂質(zhì)體法瞬時轉(zhuǎn)染大鼠血管平滑肌細胞，當質(zhì)粒:Lipofectamine 2000為3:7.5時轉(zhuǎn)染效率最高。(3) 質(zhì)粒:Lipofectamine 2000為3:7.5時轉(zhuǎn)染質(zhì)粒，其中重組質(zhì)粒X2-2-3對(P)RR抑制率最高，故進一步的實驗將選擇重組質(zhì)粒X2-2-3。2222 實驗二腎素及其特異性受體對大鼠血管平滑肌細胞增殖、Cyclin D1及PCNA表達的影響第一部分：不同濃度腎素

20、對VSMCs 增殖、Cyclin D1及PCNA表達的影響(1) CCK-8 法檢測不同濃度Renin對VSMCs 增殖的影響結(jié)果顯示，與空白組比較，對照組OD值無顯著差異（P>0.05)；與對照組比較， 10-10mol/L Renin組、10-9 mol/LRenin組、10-8 mol/L Renin組OD值顯著升高(均P<0.05)，提示腎素可呈濃度依賴性促進VSMCs 增殖，這種作用與AngⅡ生成無關(guān)。(2) 流式細胞術(shù)檢測不

21、同濃度Renin對VSMCs細胞周期的影響結(jié)果顯示，與空白組比較，對照組G1期構(gòu)成比，S 期、G2 期構(gòu)成比、增殖指數(shù)均無顯著差異(均P>0.05)；與對照組比較， 10-10mol/L Renin組、10-9 mol/L Renin組、10-8 mol/L Renin組G1期構(gòu)成比顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，S 期構(gòu)成比及增殖指數(shù)顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，而G2 期構(gòu)成比無顯著差異(均P>0.05

22、)，提示腎素可呈濃度依賴性促進VSMCs 增殖，這種作用與AngⅡ生成無關(guān)。(3) real-time PCR、Western blot 法檢測不同濃度Renin對VSMCs Cyclin D1、PCNAmRNA和蛋白的影響結(jié)果顯示，與空白組比較，對照組PCNA、Cyclin D1mRNA和蛋白無顯著差異(均P>0.05)；與對照組比較， 10-10mol/L Renin組、10-9 mol/L Renin組、10-8 mol/L Re

23、nin組PCNA、Cyclin D1mRNA和蛋白顯著升高(均P<0.05)，且呈濃度依賴性，提示腎素可呈濃度依賴性促進VSMCs Cyclin D1、PCNA mRNA和蛋白，這種作用與AngⅡ生成無關(guān)。第二部分探討((P)RR對VSMCs 增殖、Cyclin D1及PCNA表達的影響(1) CCK-8 法檢測((P)RR 干擾對VSMCs 增殖的影響結(jié)果顯示，與Negtive組比較，對照組OD值無顯著差異（P>0.05)；與對照組比

24、較， 給予PDGF-BB 10nmol/L 處理后，細胞OD值顯著升高（P<0.05)， 給予Renin 10-9 mol/L 處理后，細胞OD值顯著升高（P<0.05)。與PDGF-BB 處理組比較，RNAi+PDGF-BB 處理組，細胞OD值顯著降低（P<0.05)。與Renin 處理組比較，RNAi+Renin 處理組，細胞OD值亦顯著降低（P<0.05)。提示(P)RR在VSMCs 增殖中起重要作用。(2) 流式細胞術(shù)檢測((P

25、)RR 干擾對VSMCs的細胞周期的影響結(jié)果顯示，與Negtive組比較，對照組G1期構(gòu)成比，S 期、G2 期構(gòu)成比、增殖指數(shù)均無顯著差異(均P>0.05)；與對照組比較， 給予PDGF-BB 10nmol/L和Renin 10-9 mol/L 處理后，G1期構(gòu)成比顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，S 期構(gòu)成比及增殖指數(shù)顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，而G2 期構(gòu)成比無顯著差異(均P>0.05)；與PDGF-B

26、B 處理組比較，RNAi+PDGF-BB 處理組，G1期構(gòu)成比顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05)，S期構(gòu)成比及增殖指數(shù)顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，而G2 期構(gòu)成比無顯著差異（P>0.05)；與Renin 處理組比較，RNAi+Renin 處理組，G1期構(gòu)成比顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05)，S 期構(gòu)成比及增殖指數(shù)顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，而G2 期構(gòu)成比無顯著差異（P>0.05)。

27、進一步提示， (P)RR在VSMCs 增殖中起重要作用。(3) real-time PCR和Western blot 法檢測(P)RR 干擾對VSMCs cyclinD1、PCNA mR mRNA NA和蛋白的影響結(jié)果顯示，與Negtive組比較，對照組PCNA、Cyclin D1mRNA和蛋白無顯著差異(均P>0.05)；與對照組比較， 給予PDGF-BB 10nmol/L和Renin 10-9mol/L 處理后，PCNA、Cycli

28、n D1mRNA和蛋白顯著升高(均P<0.05)；與PDGF-BB處理組比較，RNAi+PDGF-BB 處理組，PCNA、Cyclin D1mRNA和蛋白顯著降低（P<0.05)；與Renin 處理組比較，RNAi+Renin 處理組，PCNA、Cyclin D1mRNA和蛋白顯著降低（P<0.05)。進一步提示，(P)RR在VSMCs 增殖中起重要作用。3333 實驗三氧化應(yīng)激在腎素及其特異性受體促大鼠血管平滑肌增殖中的作用及機制第一

29、部分探討DPI(NADPH 氧化酶抑制劑))))對腎素促VSMCs 增殖、Cyclin D1及PCNA表達的影響(1)不同濃度Renin對VSMCs細胞內(nèi)ROS 生成的影響，NADPH是其ROS的主要來源結(jié)果顯示，與空白組比較，對照組平均熒光強度值無顯著差異（P>0.05)；與對照組比較， 10-10mol/L Renin組、10-9 mol/L Renin組、10-8 mol/L Renin組平均熒光強度值顯著升高(均P<0.05)，

30、呈濃度依賴性，提示腎素可呈濃度依賴性促進VSMCs ROS生成，這種作用于AngⅡ生成無關(guān)。與對照組比較，DPI 處理組平均熒光強度值無顯著差異（P>0.05)；與10-9 mol/L Renin組比較，Renin 10-9+DPI組平均熒光強度值顯著降低（P<0.05)，提示，NADPH 氧化酶在腎素通過(P)RR 促進VSMCs 產(chǎn)生ROS中起重要作用。(2) DPI對Renin 處理后VSMCs細胞內(nèi)SOD、MDA 生成的影響結(jié)果

31、顯示，與空白組比較，對照組MDA、SOD水平無顯著差異(均P>0.05)；與對照組比較， 10-10mol/LRenin組、10-9 mol/L Renin組、10-8 mol/L Renin組MDA 顯著升高（P<0.05)，呈濃度依賴性，而SOD水平顯著降低（P<0.05)，呈濃度依賴性，提示腎素可呈濃度依賴性促進VSMCs 產(chǎn)生MDA，而抑制SOD 生成，這種作用于AngⅡ生成無關(guān)。與對照組比較，DPI 處理組MDA、SOD水平無

32、顯著差異(均P>0.05)；與10-9 mol/L Renin組比較，Renin 10-9+DPI組MDA水平顯著降低（P<0.05)，而SOD水平顯著升高（P<0.05)。提示NADPH 氧化酶在腎素通過(P)RR 介導(dǎo)的作用中起重要作用。(3) DPI對Renin 處理后VSMCs細胞周期的影響結(jié)果顯示，與空白組比較，對照組G1期構(gòu)成比，S 期、G2 期構(gòu)成比、增殖指數(shù)均無顯著差異（P>0.05)；與對照組比較，10-9 mol/L

33、 Renin組G1期構(gòu)成比顯著降低（P<0.05)，S 期構(gòu)成比及增殖指數(shù)顯著升高(均P<0.05)，而G2 期構(gòu)成比無顯著差異（P>0.05)。提示腎素可呈濃度依賴性促進VSMCs 增殖，這種作用于AngⅡ生成無關(guān)。與對照組比較，DPI 處理組G1期構(gòu)成比，S 期、G2 期構(gòu)成比、增殖指數(shù)均無顯著差異(均P>0.05)；與10-9 mol/L Renin組比較，Renin 10-9+DPI組G1期構(gòu)成比顯著升高（P<0.05)，S 期

34、構(gòu)成比及增殖指數(shù)顯著降低(均P<0.05)，而G2 期構(gòu)成比無顯著差異（P>0.05)。提示NADPH 氧化酶在腎素通過(P)RR 介導(dǎo)的細胞增殖作用中起重要作用。(4) real-time PCR和Western blot 法檢測DPI對Renin 處理后VSMCs cyclinD1、PC PCNA NAmRNA和蛋白的影響結(jié)果顯示，與空白組比較，對照組PCNA、Cyclin D1mRNA和蛋白無顯著差異(均P>0.05)；與對照組比

35、較， 10-9 mol/L Renin 處理后，PCNA、Cyclin D1mRNA和蛋白顯著升高(均P<0.05)，提示腎素可呈濃度依賴性促進VSMCs增殖，這種作用于AngⅡ生成無關(guān)。與對照組比較，DPI 處理組PCNA、Cyclin D1mRNA和蛋白無顯著差異(均P>0.05)，與10-9 mol/L Renin組比較，Renin 10-9+DPI組PCNA、Cyclin D1mRNA和蛋白顯著降低(均P<0.05)，提示NAD

36、PH 氧化酶在腎素通過(P)RR 介導(dǎo)的細胞增殖作用中起重要作用。第二部分探討((P)RR在腎素誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激中的作用(1) (P)RR 干擾對VSMCs細胞內(nèi)SOD、MDA 生成的影響結(jié)果顯示，與Negtive組比較，對照組SOD、MDA水平無顯著差異(均P>0.05)；與對照組比較，給予PDGF-BB10nmol/L和Renin 10-9 mol/L 處理后，MDA水平顯著升高(均P<0.05)，SOD水平顯著下降(均P<0.05)

37、。與PDGF-BB 處理組比較，RNAi+PDGF-BB 處理組，MDA水平顯著降低（P<0.05)，SOD水平顯著升高（P<0.05)；與Renin 處理組比較，RNAi+Renin處理組，MDA水平顯著降低（P<0.05)，SOD水平顯著升高（P<0.05)，提示NADPH氧化酶在腎素通過(P)RR 介導(dǎo)的作用中起重要作用。(2) real-time PCR和Western blot 法檢測((P)RR 干擾對VSMCs NOX1m

38、RNA和蛋白的影響結(jié)果顯示，與Negtive組比較，對照組NOX1mRNA和蛋白水平無顯著差異(均P>0.05)；與對照組比較，給予PDGF-BB 10nmol/L和Renin 10-9 mol/L 處理后，NOX1mRNA和蛋白水平顯著升高(均P<0.05)。與PDGF-BB 處理組比較，RNAi+PDGF-BB處理組，NOX1mRNA和蛋白水平顯著降低(均P<0.05)；與Renin 處理組比較，RNAi+Renin 處理組，NOX

39、1mRNA和蛋白水平顯著降低(均P<0.05)，提示(P)RR在NADPH 氧化酶的激活中起重要作用。4444 實驗四腎素（原）受體在血管損傷后內(nèi)膜增生中的作用(1) 頸總動脈損傷后各組對新生內(nèi)膜影響的情況HE 染色后用計算機圖像分析系統(tǒng)檢測各組動脈內(nèi)膜和中層面積，結(jié)果顯示，假手術(shù)組大鼠頸總動脈內(nèi)腔面光滑，單層內(nèi)皮細胞覆蓋整個管腔，無新生內(nèi)膜增生；與假手術(shù)組比較，損傷組在損傷后14d，新生內(nèi)膜明顯，造成明顯的管腔狹窄，內(nèi)膜/中膜面積比(

40、I/M) 顯著增大（P<0.05)；氯沙坦組和高HRP組可見有新生內(nèi)膜增生，但程度較損傷組明顯減輕，內(nèi)膜/中膜面積比(I/M)亦顯著降低(均P<0.05)；而低HRP組新生內(nèi)膜情況和I/M 比值較損傷組無顯著差異（P>0.05)。(2) 頸總動脈損傷后HRP ((((腎素受體阻斷劑))))對血管壁細胞CyclinD1和PCNA mRNA和蛋白表達的影響結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，損傷組CyclinD1和PCNAmRNA和蛋白表達明顯增高(

41、均P<0.05)；與損傷組比較，losartan組、高HRP組CyclinD1和PCNA mRNA和蛋白表達明顯降低(均P<0.05)，而低HRP組則無明顯變化(均P>0.05)；與losartan組比較，低HRP組CyclinD1和PCNA mRNA表達和蛋白無明顯降低(均P>0.05)。(3) 頸總動脈損傷后HRP對血管壁細胞SOD和MDA 含量的影響結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，損傷組MDA水平明顯增高（P<0.05)，而SOD水平明

42、顯降低（P<0.05)；與損傷組比較，losartan組、高HRP組MDA水平明顯降低(均P<0.05)，SOD水平明顯升高(均P<0.05)，而低HRP組則無明顯變化(均P>0.05)；與losartan組比較，高HRP組SOD和MDA水平無明顯降低(均P>0.05)。(4) 頸總動脈損傷后HRP對血管壁細胞NOX1mRNA和蛋白表達的影響結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，損傷組NOX1mRNA和蛋白表達明顯增高(均P<0.05)；與損傷組比

43、較，losartan組、高HRP組NOX1mRNA和蛋白表達明顯降低(均P<0.05)，而低HRP組則無明顯變化(均P>0.05)；與losartan組比較，高HRP組NOX1mRNA和蛋白表達無明顯降低(均P>0.05)。
　　 結(jié)論：1. 成功構(gòu)建了(P)RR基因miRNA 干擾質(zhì)粒，并成功篩選出可有效干擾大鼠(P)RR基因的miRNA 干擾質(zhì)粒，為進一步實驗奠定基礎(chǔ)。2. 腎素可通過(P)RR 促進大鼠血管平滑肌細胞的增殖