四硫代鉬酸銨抑制順鉑與人銅伴侶蛋白Atox1的相互作用.pdf

1、順鉑是臨床上廣泛使用的抗癌藥物。它通過(guò)與細(xì)胞核內(nèi)DNA結(jié)合造成DNA損傷，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。但是，只有少量的順鉑能進(jìn)入細(xì)胞核并與DNA結(jié)合。越來(lái)越多的研究表明，一些與銅轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的蛋白質(zhì)可以與順鉑結(jié)合，導(dǎo)致進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)的順鉑減少。銅伴侶蛋白Atox1被認(rèn)為與細(xì)胞內(nèi)順鉑的轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)。最近晶體結(jié)構(gòu)研究表明Atox1的CXXC(C為半胱氨酸)金屬結(jié)構(gòu)域可以直接與順鉑結(jié)合;細(xì)胞內(nèi)核磁共振結(jié)果也證實(shí)了在細(xì)胞內(nèi)Atox1蛋白與順鉑的結(jié)合。因此，Atox1蛋

2、白被認(rèn)為可以作為克服細(xì)胞對(duì)順鉑耐藥性的藥物作用靶點(diǎn)。
　　四硫代鉬酸銨([(NH4)2MoS4]，TM)是臨床上用于治療Wi1son病的銅螯合劑。TM能夠通過(guò)降低銅的含量抑制腫瘤周邊血管的產(chǎn)生，從而抑制腫瘤生長(zhǎng)。它也可以與血清白蛋白、銅藍(lán)蛋白和金屬硫蛋白等多種銅蛋白結(jié)合，調(diào)節(jié)銅的含量。值得注意的是多項(xiàng)研究表明，TM可以通過(guò)選擇性的增加腫瘤組織中的DNA鉑化量來(lái)增強(qiáng)順鉑的癌癥治療效果;同時(shí)TM也可以減弱細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性;但是，這種

3、協(xié)同作用的產(chǎn)生原因并不清楚。有研究提出TM和順鉑的協(xié)同作用可能是由于TM的銅螯合能力。最近，X射線晶體結(jié)構(gòu)顯示TM可以與酵母銅伴侶蛋白Atx1結(jié)合，形成穩(wěn)定的[TM·Cu·(Cu-Atx1)3]復(fù)合物。有趣的的是，Atx1是人銅分子伴侶蛋白Atox1的類似物，而人銅伴侶蛋白Atox1被認(rèn)為與順鉑的耐藥性有關(guān)。基于這些發(fā)現(xiàn)，我們推測(cè)TM可能干擾Cu-Atox1與順鉑之間的相互作用，因此降低細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性。
　　在本文中，我們研究

4、了TM對(duì)Cu-Atox1與順鉑反應(yīng)的影響。結(jié)果證實(shí)了TM與溶液中的Cu-Atox1反應(yīng)可以形成三聚體，并抑制Cu-Atox1的鉑化。此外，TM能夠抑制順鉑誘導(dǎo)的Cu-Atox1的解折疊和聚集。同時(shí)，我們也使用了apo-Atox1和Ag-Atox1作為Cu-Atox1的對(duì)照。有趣的是，TM在相同實(shí)驗(yàn)條件下只能抑制Cu-Atox1的鉑化，而不能阻止apo-Atox1、Ag-Atox1與順鉑的反應(yīng)。該結(jié)果表明以Cu-S-Mo為中心的三聚體復(fù)合

5、物的形成是TM抑制順鉑與Cu-Atox1反應(yīng)，進(jìn)而克服依賴Atox1蛋白的順鉑耐藥性的關(guān)鍵因素。這些結(jié)果有助于了解TM和順鉑在癌癥化療中的協(xié)同作用。
　　第一章首先對(duì)鉑類藥物的抗癌機(jī)理做了文獻(xiàn)綜述。然后，重點(diǎn)介紹了鉑類抗癌藥物與銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的相互作用。主要包括銅攝取蛋白Ctr1、銅伴侶蛋白Atox1和銅泵出蛋白ATPae的結(jié)構(gòu)和功能，以及它們?cè)阢K轉(zhuǎn)移中發(fā)揮的重要作用。最后介紹了四硫代鉬酸銨單獨(dú)在藥物作用方面的研究現(xiàn)狀，以及四硫代鉬酸

6、銨與順鉑聯(lián)合給藥的相關(guān)研究。
　　第二章中，我們研究了TM對(duì)順鉑與Cu-Atox1反應(yīng)的影響。色譜分析和電噴霧質(zhì)譜證實(shí)了TM可以抑制順鉑與Cu-Atoxl的相互作用。二維核磁共振和圓二色譜實(shí)驗(yàn)表明TM會(huì)抑制順鉑誘導(dǎo)的Cu-Atoxl的解折疊。聚丙烯酰胺凝膠電泳方法證實(shí)了TM可以抑制順鉑誘導(dǎo)的Cu-Atoxl的聚集。同時(shí)用apo-Atoxl（沒(méi)有結(jié)合銅的Atox1蛋白）與Ag-Atoxl（結(jié)合Ag的Atox1蛋白）作為對(duì)照，發(fā)現(xiàn)在相