外源性表皮生長因子在未成熟腸道粘膜損傷中的作用及其受體表達(dá)的研究.pdf

1、目的：本課題通過觀察外源性表皮生長因子(EpidermalGrowthFactor,EGF)對未成熟腸道粘膜損傷中細(xì)胞增殖與凋亡的影響,并研究其受體表達(dá)的變化,探討表皮生長因子在未成熟腸道粘膜損傷與修復(fù)中的可能作用。
　　 方法：新生1日齡SD大鼠30只隨機(jī)分為3組,每組10只。A組為正常對照組(母乳喂養(yǎng)組);B組為模型組(NEC+母乳喂養(yǎng)組),C組為干預(yù)組(NEC+母乳喂養(yǎng)+皮下注射EGF200μg/kg·d組)。建立NEC(

2、NecrotizingEnterocolitis,NEC)模型,新生鼠置入缺O(jiān)2箱中給予100％N2流量15L/min缺氧90s,隨后置入冰箱給予4℃冷刺激,持續(xù)10min,結(jié)束后放回保育箱,每天2次,連續(xù)3天,放回母鼠身邊喂養(yǎng),最后1次缺氧、冷刺激后24h空腹處死新生鼠。取回盲部近端回腸2～3cm腸道組織固定、包埋、切片。H.E.染色比較三組間的小腸粘膜組織病理學(xué)表現(xiàn):免疫組化技術(shù)檢測腸粘膜細(xì)胞增殖(PCNA法)與凋亡(TUNEL法)

3、的變化;并應(yīng)用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)(realtimePCR)檢測三組間腸道粘膜中表皮生長因子受體(EGF-R)mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：(1)NEC建模過程中,B和C組新生鼠不同程度出現(xiàn)活動度下降、嗜睡、攝食下降、胃潴留、腹脹、腹瀉及消瘦表現(xiàn):B組體重增加值明顯低于對照組(P=0.002),C組與B組體重增加值也有明顯差異(P=0.006),C組與對照組比較無明顯差異(P=0.85)。(2)B組小腸粘膜組織病理學(xué)評分高于A

4、組,粘膜損傷嚴(yán)重;C組小腸粘膜損傷較B組減輕,表現(xiàn)為其平均組織病理學(xué)評分低于B組,但仍高于A組。(3)B組腸隱窩區(qū)PCNA陽性細(xì)胞數(shù)明顯低于A組(P=0.000);C組腸隱窩區(qū)PCNA陽性細(xì)胞數(shù)較B組增多有顯著性差異(P=0.017)。(4)B組小腸粘膜上皮細(xì)胞TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)明顯高于A組(P=0.000);C組小腸粘膜上皮細(xì)胞TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)顯著低于B組(P=0.001)。(5)B組腸粘膜細(xì)胞EGFRmRNA水平低于A組(P=

5、0.029),有顯著性差異;C組外源性EGF增加腸粘膜細(xì)胞EGFRmRNA的表達(dá)(P=0.042),與B組比較有統(tǒng)計學(xué)意義,而與A組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 結(jié)論：未成熟腸道發(fā)生壞死性小腸結(jié)腸炎時,其粘膜損傷嚴(yán)重,腸粘膜細(xì)胞除發(fā)生細(xì)胞壞死以外,細(xì)胞凋亡亦增加、細(xì)胞增殖卻減慢。外源性給予表皮生長因子,可減輕腸粘膜損傷程度,減少粘膜細(xì)胞凋亡同時也增加細(xì)胞增殖。外源性表皮生長因子還可影響未成熟腸道粘膜損傷時其受體的表達(dá)。外源性表皮生長