維生素D的受體基因多態(tài)性及其血清濃度對骨關節(jié)結(jié)核易感性的影響.pdf

1、近年來有研究發(fā)現(xiàn)，除環(huán)境與生活方式等外界因素外，個體的遺傳背景是結(jié)核病發(fā)生的另一種影響因素。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多個基因位點與結(jié)核病發(fā)病密切相關，其中維生素D受體(vitamin D receptor，VDR)是其中主要的候選基因之一。迄今為止，已發(fā)現(xiàn)不少于25個VDR基因多態(tài)性位點，其中研究較多的包括ApaⅠ、BsmⅠ、FokⅠ、TaqⅠ四個位點，是調(diào)節(jié)骨代謝的主要位點。此外，許多VDR目的基因是通過一個保守的內(nèi)分泌途徑來調(diào)節(jié)維生素D的代謝，

2、所以VDR蛋白分子或其功能上的任何變化都可能影響維生素D的代謝，從而影響骨關節(jié)結(jié)核的易感性。目前有關VDR基因多態(tài)性對于肺結(jié)核易感性的研究在國內(nèi)外已有較多報道，但VDR基因多態(tài)性對骨關節(jié)結(jié)核易感性是否有影響，國內(nèi)外相關性研究較少。至今尚無針對廣東地區(qū)漢族人群維生素D受體基因多態(tài)性與骨關節(jié)結(jié)核易感性的研究。同時，作為VDR的配體，維生素D的血清濃度是否影響骨關節(jié)結(jié)核的易感性，目前尚不明確。
　　研究目的：
　　1、通過檢測骨關

3、節(jié)結(jié)核病人與非骨關節(jié)結(jié)核者的維生素D受體基因多態(tài)性，探討維生素D受體基因多態(tài)性與中國廣東地區(qū)漢族人群骨關節(jié)結(jié)核易感性的關系。
　　2、通過檢測骨關節(jié)結(jié)核病人與非骨關節(jié)結(jié)核者的維生素D血清濃度，探討維生素D血清濃度與中國廣東地區(qū)漢族人群骨關節(jié)結(jié)核易感性的相關性。
　　研究方法：
　　1、研究對象與分組
　　1.1 結(jié)核組
　　收集2015年5月至2016年12月南方醫(yī)院、廣州市胸科醫(yī)院、廣州華僑醫(yī)院、廣州軍區(qū)

4、總醫(yī)院、廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院、河源市中醫(yī)院收治的廣東地區(qū)漢族罹患骨關節(jié)結(jié)核患者133例，男85例，女48例，年齡8-84歲，平均45.5歲。術前血液化驗指標及放射影像學符合骨關節(jié)結(jié)核的診斷，術后病灶病理切片證實結(jié)核病感染征象，病灶組織分離培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌陽性或抗酸染色陽性，納入結(jié)核組。
　　1.2 對照組
　　2015年5月至2016年12月，選取與病例組無血緣關系的130例廣東地區(qū)漢族志愿者作為對照。入選者均來自河源

5、市中醫(yī)院健康查體者;年齡20-76歲，平均43.4歲;其中男性68例，女性62例。均經(jīng)問病史查體及胸片檢查均排除肺結(jié)核及骨關節(jié)結(jié)核病史。
　　2、樣本采集
　　兩組研究對象在次日凌晨空腹抽取外周靜脈血2ml，取1ml置于EDTA抗凝管中，靜置在室溫(20-25℃)1小時后，2000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，得到的血清置于-80℃冰箱凍存待檢。剩余1ml，提取VDR全基因組DNA，置于-80℃冰箱待檢。
　　3、維生素D多態(tài)位

6、點rs7975232(ApaⅠ)、rs1544410(BsmⅠ)、rs2228570(FokⅠ)、rs731236（TaqⅠ）的檢測
　　應用SNaPshot技術檢測兩組對象維生素D受體基因各位點多態(tài)性，并進行VDR基因分型。
　　4、血清維生素D的測定
　　檢測血清25-羥維生素D(25OHD)是目前評價血清維生素D狀態(tài)的最佳方法。應用雙抗體夾心法(Elisa)測定標本中人25-羥維生素D水平，評價人體血清維生素D的

7、濃度。
　　5、數(shù)據(jù)分析
　　采用SPSS軟件(version20.0;SPSS，Chicago，IL)進行統(tǒng)計學分析。計量資料以均數(shù)±標準差((x)±s)表示（本研究的計量資料符合正態(tài)分布），計數(shù)資料用頻數(shù)表示。采用卡方檢驗比較分類變量及計數(shù)資料;采用獨立樣本t檢驗比較連續(xù)變量。雙側(cè)P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
　　研究結(jié)果：
　　1、Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗
　　根據(jù)Hardy-W

8、einberg遺傳平衡定律計算對照組各基因型的預期值。經(jīng)卡方檢驗各觀察值與期望值之間分布近似，P值均＞0.05，提示對照組樣本來自于遺傳平衡群體，有較好代表性。
　　2、一般情況比較
　　兩組研究對象在年齡、性別構成方面的差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　3、兩組VDR基因型分布頻率比較
　　維生素D受體基因ApaⅠ位點的基因型分別為野生型AA和突變型Aa、aa，三種基因型在結(jié)核組和對照組中的分布差異有統(tǒng)計

9、學意義(P＜0.05);其中結(jié)核組中AA基因型的分布頻率為49.9％，顯著高于對照組(33.1％)，與Aa基因型相比，罹患骨關節(jié)結(jié)核風險更大（OR=1.924，P＜0.05，95％CI為1.141～3.245）。
　　維生素D受體基因BsmⅠ位點的基因型分別為野生型BB和突變型Bb、bb，但在結(jié)核組和對照組內(nèi)未能測到突變型bb。兩個基因型在兩組內(nèi)的分布差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　維生素D受體基因FokⅠ位點的基因

10、型分別為野生型FF和突變型Ff、ff，三種基因型在兩組中的分布差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);其中結(jié)核組中ff基因型的分布頻率為22.6％，顯著低于對照組36.2％，與FF、Ff基因型相比，罹患骨關節(jié)結(jié)核風險更小(OR=0.458，P＜0.05，95％CI為0.235～0.893;OR=0.549，P＜0.05,95％CI為0.306～0.982)。
　　維生素D受體基因TaqⅠ位點的基因型分別為野生型TT和突變型Tt、tt，但

11、在結(jié)核組和對照組內(nèi)未能測到突變型tt。兩個基因型在兩組內(nèi)的分布差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　4、兩組血清維生素D濃度比較
　　結(jié)核組與正常對照組的25OHD濃度均數(shù)分別為25.72±6.21、27.27±5.53ng/mL，兩組濃度的差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　研究結(jié)論：
　　1、維生素D受體基因多態(tài)性位點rs7975232(ApaⅠ)、rs2228570(FokⅠ)的基因型在兩組間分布頻率

12、存在差異，提示其多態(tài)性可能與廣東地區(qū)漢族人群骨關節(jié)結(jié)核相關;其中ApaⅠ-AA基因型可能是骨關節(jié)結(jié)核的易感基因型，而FokⅠ-ff基因型可能是骨關節(jié)結(jié)核的保護基因型。rs1544410(BsmⅠ)、rs731236（TaqⅠ）基因型分布在兩組間不存在差異，提示其多態(tài)性可能與廣東地區(qū)漢族人群骨關節(jié)結(jié)核無相關性。
　　2、結(jié)核組患者血清25-羥維生素D濃度較正常組低，提示血清25-羥維生素D濃度可能與廣東地區(qū)漢族人群骨關節(jié)結(jié)核發(fā)病相關