不同頻率電針對(duì)血管性癡呆小鼠腦保護(hù)作用的比較研究.pdf

1、目的：觀察2Hz、80Hz和2/80Hz三種不同頻率電針對(duì)血管性癡呆(Vascular Dementia，VD)模型小鼠的治療效應(yīng)并進(jìn)行比較，探討電針治療VD的適宜頻率及其作用機(jī)制，為針灸臨床治療VD提供科學(xué)的電針刺激參數(shù)。
　　方法：
　　1不同頻率電針對(duì)血管性癡呆小鼠行為學(xué)及海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)的影響
　　將昆明小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、尼莫地平組、電針2 Hz組、電針80 Hz組、電針2/80 Hz

2、組六組，以反復(fù)阻斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈加尾部放血法復(fù)制缺血再灌注VD模型。假手術(shù)組小鼠分離頸總動(dòng)脈，不阻斷血流，尾部不放血。術(shù)后第4d開始進(jìn)行治療。電針組選取“百會(huì)”、“大椎”、“膈俞”、“足三里”穴，毫針刺入，接電針儀，分別施以連續(xù)波，頻率2 Hz、80 Hz及疏密波2/80 Hz，每次10min，每日1次。尼莫地平組灌胃30mg/kg/日。于治療15d后，進(jìn)行跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)和水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測學(xué)習(xí)成績，次日檢測記憶成績。行為學(xué)測試結(jié)束后，頸椎脫臼處死

3、小鼠，冰盤上快速取腦。將左腦視交叉至乳頭體組織浸入4％多聚甲醛固定，常規(guī)HE染色，光鏡下觀察小鼠腦組織海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。
　　2不同頻率電針對(duì)血管性癡呆小鼠海馬組織CGRP、NOS、MDA、SOD及TChE的影響
　　分組、造模及治療方法均同1。小鼠處死后，冰盤上快速取腦，分離出右側(cè)海馬組織，加入生理鹽水制成10％的組織勻漿，于4℃下，4000r/min離心20min，取上清液，用雙縮脲法測定蛋白含量，采用放

4、射免疫分析法測定海馬組織CGRP含量，分光光度法測定NOS、TchE活性，黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性，硫代巴比妥酸比色分析法測定MDA含量。
　　3不同頻率電針對(duì)血管性癡呆小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞促凋亡蛋白酶Caspase-3陽性表達(dá)及平均光密度值的影響
　　分組、造模及治療方法均同1。行為學(xué)測試結(jié)束后，頸椎脫臼處死小鼠，冰盤上快速取腦，將左腦視交叉至乳頭體組織浸入4％多聚甲醛固定，石蠟包埋，冠狀切片，厚5um，每個(gè)標(biāo)本切

5、片5張，隨機(jī)取3張，采用免疫組織化學(xué)SABC法檢測Caspase-3在海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞中的陽性表達(dá)，并觀察不同頻率電針對(duì)其陽性表達(dá)及平均光密度值的影響。
　　所有數(shù)據(jù)均采用SPSS軟件進(jìn)行分析處理。
　　結(jié)果：
　　1不同頻率電針對(duì)血管性癡呆小鼠行為學(xué)及海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)的影響
　　1.1行為學(xué)檢測結(jié)果
　　小鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：模型組小鼠反應(yīng)時(shí)間延長，潛伏期縮短，錯(cuò)誤次數(shù)增加，與假手術(shù)組比

6、較差異具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；電針和尼莫地平治療均可縮短反應(yīng)時(shí)間，延長潛伏期，降低錯(cuò)誤次數(shù)，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)；其中，2/80Hz組作用最明顯，與2Hz組、80Hz組、尼莫地平組比較有顯著差異(P<0.05或P<0.011)；2Hz組、80Hz組、尼莫地平組各組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　小鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：模型組小鼠游全程時(shí)間明顯延長，錯(cuò)誤次數(shù)顯著增加，

7、與假手術(shù)組比較具有顯著性差異(P<0.01)；電針和尼莫地平治療均可縮短游全程時(shí)間，減少錯(cuò)誤次數(shù)，與模型組比較具有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)；其中，電針2Hz組與2/80Hz組作用較明顯，與尼莫地平組、80Hz組比較有顯著差異(P<0.05或P<0.01)；2Hz組與2/80Hz組比較無差異(P>0.05)；尼莫地平與80Hz組比較無差異(P>0.05)。
　　1.2不同頻率電針對(duì)VD模型小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞病理

8、形態(tài)學(xué)的影響
　　海馬CA1區(qū)HE染色，光鏡下一般形態(tài)學(xué)觀察示：模型組小鼠錐體細(xì)胞脫失嚴(yán)重，排列紊亂，形狀欠規(guī)則，細(xì)胞核質(zhì)不均勻，核固縮嚴(yán)重；各治療組病變較模型組均有改善，尼莫地平組與80Hz組，細(xì)胞脫失減輕，排列仍欠規(guī)整，細(xì)胞近似圓形，細(xì)胞核質(zhì)不均勻；2Hz組細(xì)胞排列緊密，稍欠規(guī)整，細(xì)胞近似圓形，細(xì)胞核質(zhì)較均勻；2/80Hz組僅見少量細(xì)胞脫失，排列致密規(guī)整，細(xì)胞圓形，細(xì)胞核清晰，核質(zhì)均勻。
　　2不同頻率電針對(duì)血管性癡呆小

9、鼠海馬組織CGRP、NOS、MDA、SOD及TchE的影響
　　模型組CGRP含量降低，與假手術(shù)組比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)；各治療組CGRP含量較模型組均有提高(P<0.05或P<0.01)；其中2Hz組、2/80Hz組作用較明顯，與尼莫地平組、80Hz組比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05或P<0.01)；2/80Hz組較2Hz組作用更為突出(P<0.05)；80Hz組與尼莫地平組比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。<

10、br>　　模型組NOS活性提高，較假手術(shù)組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)；電針及尼莫地平治療均可降低NOS活性，與模型組比較差異顯著(P<0.01)；其中2/80Hz組作用最佳，與尼莫地平組、2Hz組、80Hz組比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；2Hz組、80Hz組、尼莫地平組各組之間比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　模型組MDA含量明顯升高，SOD活性明顯降低，與假手術(shù)組比較有顯著差異(P<0.01)；各治療組均可

11、降低MDA含量，提高SOD活性，與模型組比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P<0.05或P<0.01)；其中，2Hz組、2/80Hz組作用較明顯，與尼莫地平組、80Hz組比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05或P<0.01)；2/80Hz組較2Hz組作用更為突出(P<0.05)。
　　模型組TchE活性提高，較假手術(shù)組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)；電針及尼莫地平治療均可降低TchE活性，與模型組比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P<0.05或P<0.01)；

12、其中，2/80Hz組作用最優(yōu)，與尼莫地平組、2Hz組、80Hz組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)：2Hz組、80Hz組、尼莫地平組各組之間比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3不同頻率電針對(duì)VD小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞促凋亡蛋白酶Casepase-3陽性表達(dá)及平均光密度值的影響
　　模型組Casepase-3陽性表達(dá)為強(qiáng)陽性，平均光密度值明顯增高，與假手術(shù)組比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)；電針及尼莫地平治療均

13、可減弱陽性表達(dá)，降低平均光密度值，與模型組比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P<0.01)；其中，2Hz組、2/80Hz作用較明顯，與80Hz組、尼莫地平組比較有顯著差異(P<0.05)；2/80Hz組較2Hz組作用更為突出(P<0.05)；80Hz組與尼莫地平組比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：不同頻率電針刺激“百會(huì)”、“大椎”、“膈俞”、“足三里”穴對(duì)VD模型小鼠具有治療效應(yīng)，其作用機(jī)理可能與提高CGRP含量及SOD活性、降低