慢性頭痛模型大鼠中紋狀體邊緣區(qū)的相關(guān)研究.pdf

1、目的:近來(lái)越來(lái)越多的研究表明紋狀體內(nèi)的部分神經(jīng)核團(tuán)在痛覺(jué)傳導(dǎo)和調(diào)節(jié)過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，參與了許多急慢性疼痛類(lèi)疾病的發(fā)病過(guò)程。紋狀體邊緣區(qū)(marginal division of striatum，MrD)是由我國(guó)學(xué)者首先發(fā)現(xiàn)的紋狀體內(nèi)的功能新區(qū)。既往的研究發(fā)現(xiàn)MrD內(nèi)富含傷害性刺激神經(jīng)元和與疼痛傳導(dǎo)與調(diào)節(jié)密切相關(guān)的P物質(zhì)。近來(lái)國(guó)內(nèi)學(xué)者陳志曄等對(duì)1例左側(cè)殼核軟化灶導(dǎo)致右側(cè)軀體偏身疼痛的患者行靜息態(tài)磁共振腦功能成像研究，發(fā)現(xiàn)患者左側(cè)邊

2、緣區(qū)功能連接較健康對(duì)照顯著下降，提示邊緣區(qū)可能參與人類(lèi)疼痛調(diào)節(jié)。本研究基于以上證據(jù)，通過(guò)炎癥湯反復(fù)刺激大鼠上矢狀竇硬腦膜引發(fā)大鼠無(wú)菌性硬腦膜炎癥，建立模擬慢性偏頭痛(chronic migraine，CM)大鼠模型，觀察CM模型大鼠MrD區(qū)神經(jīng)元形態(tài)和數(shù)量的變化以及P物質(zhì)表達(dá)量的變化。另外通過(guò)單純損毀單側(cè)或雙側(cè)大鼠的MrD區(qū)以及單側(cè)或雙側(cè)損毀CM模型大鼠的MrD區(qū)，探究損毀MrD后CM模型大鼠的痛覺(jué)閾值和行為學(xué)是否發(fā)生改變，以明確MrD

3、區(qū)在大鼠CM疾病過(guò)程中的作用。
　　方法:1.雄性SD大鼠72只(220-250g)，隨機(jī)分成6組:生理鹽水對(duì)照組(n=12)、CM造模組(n=12)、CM造模+雙側(cè)損毀組(n=12)、CM造模+單側(cè)損毀組(n=12)、單純雙側(cè)損毀組(n=12)和單純單側(cè)損毀組(n=12)。通過(guò)微量注射器向大鼠硬腦膜注射炎癥湯行模擬慢性偏頭痛造模，通過(guò)立體定位技術(shù)向大鼠腦MrD區(qū)注射海人藻酸進(jìn)行損毀。
　　2.通過(guò)Von Frey纖維絲測(cè)量

4、大鼠眶周皮膚的痛覺(jué)閾值變化，并以此反應(yīng)大鼠的痛覺(jué)敏感性變化。通過(guò)觀察大鼠的行為學(xué)變化評(píng)估大鼠頭痛程度是否發(fā)生改變。
　　3.對(duì)大鼠MrD區(qū)行尼氏染色，觀察MrD區(qū)形態(tài)學(xué)改變。用免疫組化方法測(cè)量大鼠MrD區(qū)P物質(zhì)表達(dá)情況的變化。
　　4.用免疫組化方法，對(duì)大鼠中腦導(dǎo)水管周?chē)屹|(zhì)區(qū)行c-fos染色，對(duì)不同組別的c-fos陽(yáng)性表達(dá)數(shù)進(jìn)行定量分析。
　　結(jié)果:1.大鼠眶周皮膚痛覺(jué)閾值測(cè)量結(jié)果顯示，生理鹽水對(duì)照組大鼠痛覺(jué)閾值無(wú)明

5、顯變化;與生理鹽水對(duì)照組相比，偏頭痛造模組、偏頭痛造模+雙側(cè)損毀組和偏頭痛造模+單側(cè)損毀組大鼠的痛覺(jué)閾值明顯降低(P＜0.05)，但三組之間沒(méi)有明顯差異(P＞0.05);單純雙側(cè)損毀組和單純單側(cè)損毀組的痛覺(jué)閾值沒(méi)有明顯差異(P＞0.05)。
　　2.大鼠行為學(xué)分析結(jié)果顯示，與生理鹽水對(duì)照組相比，偏頭痛造模組、偏頭痛造模+雙側(cè)損毀組和偏頭痛造模+單側(cè)損毀組大鼠的單側(cè)理毛行為和休息行為時(shí)間明顯增加(P＜0.05)而探索行為時(shí)間明顯減少

6、(P＜0.05);單純雙側(cè)損毀組和單純單側(cè)損毀組大鼠的各項(xiàng)行為時(shí)間沒(méi)有顯著差異(P＞0.05)。
　　3.尼氏染色結(jié)果顯示，偏頭痛造模組大鼠MrD區(qū)梭形細(xì)胞數(shù)目與生理鹽水對(duì)照組相比沒(méi)有明顯差異(P＞0.05)，細(xì)胞形態(tài)沒(méi)有發(fā)生改變。
　　4.P物質(zhì)免疫組化染色結(jié)果顯示，偏頭痛造模組和偏頭痛造模+單側(cè)損毀組大鼠的未損毀側(cè)MrD內(nèi)P物質(zhì)含量明顯高于生理鹽水對(duì)照組(P＜0.05);偏頭痛造模+雙側(cè)損毀組、單純雙側(cè)損毀組以及偏頭痛造

7、模+單側(cè)損毀組和單純單側(cè)損毀組大鼠的損毀側(cè)MrD內(nèi)P物質(zhì)含量明顯低于生理鹽水對(duì)照組(P＜0.05)，單純單側(cè)損毀組的未損毀側(cè)MrD內(nèi)P物質(zhì)含量與生理鹽水對(duì)照組間沒(méi)有明顯差異(P＞0.05)。
　　5.C-fos免疫組化染色結(jié)果顯示，偏頭痛造模組、偏頭痛造模+雙側(cè)損毀組和偏頭痛造模+單側(cè)損毀組PAG區(qū)c-fos陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯多于生理鹽水對(duì)照組、雙側(cè)損毀組和單側(cè)損毀組。提示本實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠行硬腦膜炎癥湯灌注致慢性偏頭痛模型造模成功。