大豆規(guī)?；D(zhuǎn)基因體系構(gòu)建.pdf

1、大豆是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)十分重要的農(nóng)作物之一，富含蛋白質(zhì)、植物油和多種對(duì)人體有益的成分，是人類食品中主要的植物蛋白來(lái)源，同時(shí)也是重要的工業(yè)原料和牲畜飼料。隨著科技的發(fā)展和人們生活水平的提高，大豆的產(chǎn)量逐漸開(kāi)始無(wú)法滿足人們的生活需求，而傳統(tǒng)的育種方法又無(wú)法有效解決這一矛盾。于是自1988年開(kāi)始，越來(lái)越多的研究人員開(kāi)始利用基因工程技術(shù)，培育具有優(yōu)良性狀的大豆品種，并取得了一定的成就。但大豆的基因轉(zhuǎn)化一直存在著轉(zhuǎn)化率低、重復(fù)性差等問(wèn)題。因此，建立高效、

2、穩(wěn)定的大豆轉(zhuǎn)化技術(shù)體系仍是目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)之一。
　　 本實(shí)驗(yàn)采取目前最常用的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法，以多個(gè)大豆品種的子葉節(jié)外植體為受體材料，進(jìn)行了大豆遺傳轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。并且針對(duì)轉(zhuǎn)化過(guò)程中的重要步驟實(shí)施了一系列優(yōu)化措施，旨在通過(guò)提高農(nóng)桿菌侵染效率、叢生芽的誘導(dǎo)效率等，進(jìn)一步提高大豆再生效率和轉(zhuǎn)化效率，建立一種穩(wěn)定性好、轉(zhuǎn)化率高的大豆轉(zhuǎn)化技術(shù)體系，為今后的大豆分子育種和基因功能研究打下良好的基礎(chǔ)。
　　 本實(shí)驗(yàn)主要研究成

3、果如下：
　　 1、高再生能力的大豆基因型篩選。實(shí)驗(yàn)采用含PBI121質(zhì)粒的農(nóng)桿菌EHA105和GV3101侵染7個(gè)大豆品種的子葉節(jié)外植體，發(fā)現(xiàn)不同大豆基因型之間再生效率差異明顯，并從中篩選出中黃10號(hào)、文豐7號(hào)兩個(gè)再生效率較高的大豆品種。
　　 2、降低了組織培養(yǎng)過(guò)程中的褐化現(xiàn)象。通過(guò)對(duì)共培培養(yǎng)基進(jìn)行半胱氨酸(L-cy)濃度的梯度試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)L-cy濃度為400 mg·L-1時(shí)，能有效地抑制子葉節(jié)外植體的組織褐化現(xiàn)象，提

4、高了外植體的成活效率。
　　 3、降低了殘留農(nóng)桿菌污染。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)優(yōu)化共培后的除菌方法，配合除菌劑的使用，大大降低了殘留農(nóng)桿菌污染的比率，有效地解決了農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化體系容易造成侵染后的農(nóng)桿菌殘留污染的現(xiàn)象，保證了轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。
　　 4、提高了叢生芽的誘導(dǎo)效率。通過(guò)在恢復(fù)期去掉子葉節(jié)外植體第一組新芽的方法，大大提高了外植體誘發(fā)的叢生芽數(shù)量，從而提高了再生效率：并以此降低了叢生芽發(fā)育的頂端優(yōu)勢(shì)，提高了篩選效率。

5、>　　 5、Thidiazuron(TDZ)的活化效果。TDZ是一種高效的細(xì)胞分裂素，本實(shí)驗(yàn)在叢生芽誘導(dǎo)階段添加了適量的TDZ，結(jié)果發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)的活性細(xì)胞數(shù)量得到了大幅度增加。
　　 6、生根培養(yǎng)基的優(yōu)化。通過(guò)對(duì)多品種的生根誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)，確定了生根誘導(dǎo)高效穩(wěn)定的生根培養(yǎng)基配比及IBA的最適濃度1.0mg·L-1，并且選出了容易發(fā)根的大豆品種中黃10號(hào)和文豐7號(hào)。
　　 7、優(yōu)化煉苗移栽步驟。本實(shí)驗(yàn)對(duì)再生植株的煉苗移栽步驟作了一