異氟烷、七氟烷急性暴露對E17大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞發(fā)育的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　 觀察異氟烷、七氟烷急性暴露對E17大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響，探討揮發(fā)性麻醉藥影響胎鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞發(fā)育的機(jī)制。
　　 方法:
　　 1．用機(jī)械吹打法分離培養(yǎng)E17SD大鼠神經(jīng)干細(xì)胞并穩(wěn)定傳至3-4代，行nestin免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定神經(jīng)干細(xì)胞．
　　 2．將細(xì)胞隨機(jī)分為3組：對照組(C)、3.6％七氟烷組(S)、2.3％異氟烷組(D，每組暴露6h后行CCK-8檢測，并采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈

2、反應(yīng)法(RT-PCR)方法及免疫蛋白印跡(WesternBlot)檢測方法來測定樣本中Sox2、BDNF、GABAARα1mRNA及蛋白含量。
　　 3．將細(xì)胞隨機(jī)分為2.3％異氟烷組(D、異氟烷+miscimol組(IM)、異氟烷+bicuculline組(IB)3組，暴露前半小時(shí)IM組及IB組分別加入GABA-A受體激動(dòng)劑misicimol(10uM)與拮抗劑bicuculline(50uM)，每組分別暴露6h，6h后采用R

3、T-PCR方法及WesternBlot檢測方法來測定樣本中Sox2、BDNF、GABAAR-α1mRNA及蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1．CCK-8檢測顯示，與C組相比，I組明顯抑制了神經(jīng)干細(xì)胞的增值(P＜0.05)，S組較對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2．與C組比較，I組Sox2mRNA及蛋白水平明顯降低(P＜0.05)，BDNFmRNA及蛋白水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)
　　

4、3．與I組比較，IM組Sox2mRNA及蛋白水平明顯降低，BDNFmRNA及蛋白水平明顯升高，IB組Sox2mRNA水平明顯升高，BDNFmRNA水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)
　　 4．GABAAR-α1的mRNA水平在各組間沒有明顯差異。
　　 結(jié)論：
　　 1．異氟烷、七氟烷急性暴露對E17海馬神經(jīng)干細(xì)胞發(fā)育的影響是不同的。異氟烷較七氟烷明顯影響了神經(jīng)干細(xì)胞的活性，抑制了神經(jīng)干細(xì)胞的增殖。<