葡萄糖濃度波動(dòng)對(duì)糖尿病小鼠各臟器及牛血管細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、隨著對(duì)糖尿病及其慢性并發(fā)癥研究的逐步深入，餐后高血糖(PPHG)和糖基化終產(chǎn)物(AGEs)在糖尿病并發(fā)癥中所起的作用已越來(lái)越受到重視。國(guó)內(nèi)外很多臨床醫(yī)學(xué)已經(jīng)十分關(guān)注血糖波動(dòng)在糖尿病及其慢性并發(fā)癥中的危害作用，但是血糖波動(dòng)的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道較少，尤其是血糖波動(dòng)動(dòng)物模型的建立及葡萄糖濃度波動(dòng)和AGEs聯(lián)合損傷血管細(xì)胞的研究都未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本文的創(chuàng)新之處就是通過(guò)糖尿病小鼠血糖波動(dòng)模型的建立來(lái)研究血糖波動(dòng)對(duì)糖尿病小鼠臟器的影響，以及通過(guò)體外細(xì)胞

2、培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)研究葡萄糖濃度波動(dòng)對(duì)血管細(xì)胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)的影響，同時(shí)還研究了葡萄糖濃度波動(dòng)和AGEs的聯(lián)合作用對(duì)血管細(xì)胞損傷的影響，為進(jìn)一步深入探討血糖波動(dòng)對(duì)糖尿病動(dòng)物及血管細(xì)胞的損傷作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 本文將從以下幾個(gè)方面進(jìn)行研究： 1、血糖波動(dòng)動(dòng)物模型的建立：建立糖尿病小鼠的血糖波動(dòng)模型，為研究和探討血糖波動(dòng)的危害提供相關(guān)的動(dòng)物模型。從正常的小鼠和四氧嘧啶(Alloxan)誘導(dǎo)的I型糖尿病模型小鼠中各隨機(jī)挑選出8只小鼠，實(shí)

3、驗(yàn)分組為正常組、正常波動(dòng)組、糖尿病模型組、糖尿病模型+波動(dòng)組，模擬人一日三餐后的血糖波動(dòng)情況。每天于8：00，12：00，16：00三次為正常波動(dòng)組和糖尿病模型+波動(dòng)組小鼠腹腔注射葡萄糖。每一周作一次小鼠全天的血糖監(jiān)測(cè)，四周后檢測(cè)各組小鼠的糖耐量和血清中果糖胺的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腹腔注射葡萄糖建立的血糖波動(dòng)模型比較穩(wěn)定，方法簡(jiǎn)單，重復(fù)性好；血糖波動(dòng)后糖尿病小鼠糖耐量水平降低顯著，果糖胺水平則顯著增加。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明以此方法建立的血糖波動(dòng)

4、模型簡(jiǎn)單可行，結(jié)果穩(wěn)定。 2、血糖波動(dòng)對(duì)小鼠臟器的影響：以上述方法建立的血糖波動(dòng)動(dòng)物模型為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，實(shí)驗(yàn)四周后檢測(cè)各組小鼠臟器的損傷情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，血糖波動(dòng)使I型糖尿病小鼠的多個(gè)臟器都受到了不同程度的損傷，尤其是血糖波動(dòng)后糖尿病模型+波動(dòng)組小鼠臟器的損傷情況比糖尿病模型組小鼠明顯得多，說(shuō)明血糖波動(dòng)對(duì)糖尿病小鼠臟器的危害比持續(xù)高糖組更加嚴(yán)重。 3、葡萄糖濃度波動(dòng)變化對(duì)血管細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)影響的研究：以體外培養(yǎng)的牛

5、胸主動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。通過(guò)光鏡和電鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常組相比，持續(xù)高糖和葡萄糖濃度的波動(dòng)變化都會(huì)使血管細(xì)胞的形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，而葡萄糖濃度波動(dòng)對(duì)血管細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)的影響更大，說(shuō)明了細(xì)胞結(jié)構(gòu)的改變將引起細(xì)胞相關(guān)功能的改變。 4、葡萄糖濃度波動(dòng)與糖基化終產(chǎn)物的聯(lián)合作用對(duì)血管細(xì)胞的損傷研究：以體外培養(yǎng)的牛胸主動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。加入不同濃度的

6、葡萄糖、AGEs及葡萄糖濃度波動(dòng)與AGEs的聯(lián)合作用作為損傷劑，利用生化方法測(cè)定細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量，用MTT法測(cè)定細(xì)胞的活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常組相比，不同濃度的葡萄糖組、AGEs組、葡萄糖濃度波動(dòng)組以及聯(lián)合損傷組對(duì)主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用和對(duì)平滑肌細(xì)胞有明顯的促進(jìn)作用，主動(dòng)脈血管細(xì)胞的LDH的泄漏率明顯增加，GSH、SOD的含量

7、減少，MDA、NO的含量增加；葡萄糖濃度波動(dòng)組與單純的葡萄糖濃度組比較上述指標(biāo)的變化明顯；當(dāng)培養(yǎng)基中含有AGEs時(shí)，這種損傷進(jìn)一步加重，其中以聯(lián)合損傷組的作用最為明顯，說(shuō)明葡萄糖濃度波動(dòng)和AGEs的聯(lián)合作用對(duì)細(xì)胞的損傷最嚴(yán)重。 由此得出如下結(jié)論： (1)無(wú)論是正常小鼠還是I型糖尿病小鼠均能通過(guò)腹腔注射葡萄糖造成血糖波動(dòng)模型，且此法簡(jiǎn)單易行，重復(fù)性好； (2)血糖波動(dòng)后糖尿病小鼠臟器的損傷更為嚴(yán)重； (3)